[发明专利]从石油污染土样中分离组合菌液来降解原油的方法

摘要

本发明公开了一种从石油污染土样中分离组合菌液来降解原油的方法，先从油井中采集污染土样；将原油降解菌的富集和分离、纯化培养；然后制得组合菌液，最后将制得的组合菌液喷洒在土壤中，降解原油。采用本发明的方法，能够降解石油、还原土壤。

主权项

一种从石油污染土样中分离组合菌液来降解原油的方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1，从油井中采集污染土样；从油井取出石油污染土样，其中油井深度为800～1000m；温度为26℃～30℃，土样经碎散、除杂、过筛至1.25mm、混均；步骤2，原油降解菌的富集和分离、纯化培养；取上步的污染土样10g添加到装有200mL无机培养基的三角瓶中，在30℃、200r/min的恒温摇床上进行振荡培养7d，培养7d后取其中的培养物到新鲜的同样的无机培养基中再培养7d、30℃重复培养，得到富集培养基；移取10ml的富集培养基接入新鲜含油无机盐培养基中，在温度30℃下培养7d，7d后取其中的培养物到新鲜的同样的含油无机盐培养基中再培养7d、30℃重复培养、共重复3次，7天为一周期，经过3个周期的驯化后，得到驯化培养液；在无菌的条件下，用接种环蘸取驯化培养液，在含油无机盐培养基的平板上划线后，平板倒置于30℃恒温培养箱中培养24h，得到典型菌落，然后将典型菌落在分离培养基的平板上反复划线纯化后得到单一菌落，分别将纯化的单一菌落的菌株接种至斜面培养基上培养后，保存于4℃冰箱中；步骤3，组合菌液配置分别将上步得到的纯化的单一菌落的菌株接入种子培养基，培养温度30℃，培养24h后得到菌悬液，分别吸取5mL菌悬液接入50mL降解液体培养基中，于30℃，150r/min摇床培养7d，并分别测定单一菌落菌株的原油降解率；利用16SrRNA鉴定原油降解率超过70％的细菌，将其中的假单胞菌、黄杆菌、棒杆菌分别接入种子培养基进行扩大培养，培养温度30℃，培养24h后，分别吸取浓度为108-109CFU/ml的1mL假单胞菌的菌悬液、浓度为108-109CFU/ml的20mL黄杆菌的菌悬液和浓度为108-109CFU/ml的1mL棒杆菌的菌悬液，充分混合配成组合菌菌液制剂；步骤4，组合菌液降解原油将占土壤质量3％的组合菌液制剂用喷雾器均匀地接入土壤，根据培养基成分比例加入2g的MgSO4，0.5g的CuSO4，0.5g的MnSO4，0.5g的FeSO4.7H2O0.5g的CaCl2，用当地地下水调节土层水分至20％左右，最后进行充分翻耕以便各种材料混合均匀。