[发明专利]来自海洋的链霉菌的分离培养方法及其用途

摘要

本发明是一种来自海洋的链霉菌BM-2(Streptomyces sp.BM-2)的分离培养方法，其特征在于，其步骤如下：它包括富集培养、菌体的分离纯化、菌株的筛选和菌株的鉴定等步骤，根据形态学、生理生化试验结果以及16SrDNA的同源性分析表明分离培养的菌株为链霉菌BM-2(Streptomyces sp.BM-2)。该链霉菌BM-2具有抑制多种植物病原真菌及抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌的作用。

主权项

1、一种来自海洋的链霉菌BM-2(Streptomyces sp.BM-2)的分离培养方法，其特征在于，其步骤如下：(1)富集培养：从连云港海域采集海泥，将海泥10g放入盛有50mL的无菌海水的三角瓶中振荡摇匀，取5mL悬浮液加入到50mL富集培养液中，190r/min，25℃条件下摇床培养5天；(2)菌体的分离纯化：用移液枪取富集培养5天的培养液1.0mL加入到盛有9.0mL无菌海水的试管中，制备成10-1的样品稀释液；然后采用梯度稀释的方法连续稀释，分别制备成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的样品稀释液；然后分别取10-5、10-6和10-7的样品稀释液0.2ml放到海水高氏1号培养基平板上，用涂布棒涂布均匀后，置于25℃的培养箱中培养，长出菌落；再分别挑取海水高氏1号培养基平板上的菌落，用三区划线的方法接种到海水高氏1号培养基平板上，置于25℃培养箱中培养，反复划线直至得到纯的菌株单菌落，将若干个纯化的菌株分别转接到海水高氏1号培养基试管斜面中保存；(3)菌株的筛选：采用平板对峙培养法，以供试的植物病原真菌小麦赤霉病菌和棉花枯萎病菌为受试菌，分别测定分离纯化得到的不同菌株的抗植物病原真菌活性；操作时在PDA培养基平板中央接种培养5d的植物病原真菌，在植物病原真菌四周距培养皿壁15mm处对称划线接种分离纯化得到的不同菌株，25℃倒置恒温培养，观察植物病原真菌菌落生长状况，培养5d后测量抑菌带宽度；每个菌株为一处理，每处理重复3次；选取一株对前述2种植物病原真菌的抑菌带宽度平均值大于15mm的菌株，记为BM-2菌株；(4)菌株的鉴定：将BM-2菌株于25℃下培养5天，观察记录菌落和细胞形态，同时进行生理生化试验，并进行16SrDNA测序分析；根据形态学和生理生化试验结果初步认为菌株BM-2属于链霉菌属；16SrDNA的同源性分析表明，BM-2菌株最接近于Streptomyces sp.，二者的16SrDNA序列相似性为99％，BM-2菌株为链霉菌(Streptomyces sp.)。