[发明专利]一种获得栽培菊花与近缘属间远缘杂种的方法

摘要

本发明获得菊属与近缘属的属间远缘杂种的方法，属于生物技术育种领域。选择栽培菊花品种为母本，以野生的抗病虫能力强或具特异观赏价值的近缘属物种为父本，采用组织培养手段进行杂种胚的离体培养，以克服菊属与近缘属远缘杂交后合子胚败育的障碍。对获得的后代材料进行杂种形态学鉴定和原位杂交鉴定，选择茎、叶、花序、表皮毛等形态学特征介于双亲之间、与母本不同、出现父本特异性状或双亲不具有的新性状的后代材料，进行原位杂交，若染色体组成为分别来源于双亲，即为获得的属间远缘杂交种。应用本方法成功地实现了菊属与多个近缘属的属间远缘杂交种，对现有栽培菊花品种进行了改良，并创造了一批有应用价值的新种质。

主权项

1、一种获得栽培菊花与近缘属间远缘杂种的方法，包括：1)栽培菊花与近缘属间远缘杂交后代材料的获得选择菊属栽培菊花[Dendranthema morifolium]和近缘属物种亚菊属矶菊[Ajania pacificum]、蒿属黄金艾蒿[Artemisia vulgaris]、茼蒿属白晶菊[Chrysanthemum paludosum]及芙蓉菊属芙蓉菊[Crossostephium chinense]，于温室内进行杂交，以栽培菊花为母本进行人工去雄并套袋隔离，以近缘属物种为父本在筒状花散粉前套袋，于上午9～10时或下午3～4时授粉，同一花序重复授粉2次；接种时取杂交授粉后15～18d的头状花序，剥取边缘舌状花的子房，在超净工作台上依次开展以下操作：用体积比为75％的乙醇浸泡30s，质量百分比为0.1％的升汞溶液消毒6min，无菌水冲洗4～5次；用接种针将子房内的胚珠剥出，接入MS添加激动素KT 2.0mg·L-1+生长素IAA1.0mg·L-1或者添加细胞分裂素6-BA2.0mg·L-1+生长素NAA 0.5mg·L-1的培养基上，每瓶接种胚珠10个，每处理重复20～30瓶，诱导愈伤组织形成；30d后转入分化培养基，分化培养基为MS+细胞分裂素6-BA2.0mg·L-1+生长素NAA0.1mg·L-1，诱导愈伤组织分化出苗；得到幼苗后转入MS+细胞分裂素6-BA 0.2mg·L-1的培养基中进行扩繁和继代培养，幼苗移至1/2MS添加生长素NAA 0.1mg·L-1的培养基上生根，培养温度为23±2℃，光照周期为14h·d-1，光照强度为1600～2000lx，即可获得菊属栽培菊花与近缘属物种属间远缘杂交后代的无菌苗；2)属间杂种的获得对后代材料进行形态学鉴定，选择形态学特征在株高、冠径、分枝性、叶片、花序、表皮毛等方面出现介于双亲之间、与母本不同、父本特异性状或父母本都不具备的新性状的植株，以双亲之一的总DNA用荧光素标记后作为探针，进行分子原位杂交鉴定；经鉴定后体细胞内含有分别来源于双亲的基因组的后代材料，即为获得的菊属栽培菊花与近缘属物种的属间杂交种。