[发明专利]牛胚胎性别的无创伤性鉴定分子检测方法

摘要

本发明属于分子生物学及畜牧业领域，公开了牛胚胎性别的无创伤性鉴定分子检测方法。该方法通过妊娠牛血样抽提DNA模板，以牛Y染色体特异性序列设计两对巢式引物，进行巢式PCR，通过扩增产物是否出现阳性条带判断牛胚胎的性别。该方法实现牛胚胎的性别诊断，避免对胚胎的损害，以保证胚胎的正常发育和生长，为母牛胚胎性别鉴定提供了一条准确、简洁、快速的新方法，并为牛性别控制和胎儿伴性遗传性疾病的诊断与控制提供了一种手段。

主权项

1、牛胚胎性别鉴定分子检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：a.抽提DNA模板：采集妊娠牛血样，分离游离DNA；b.设计引物：以牛Y染色体特异性序列设计两对特异性引物，其中第二对特异性引物扩增片断的序列包含在第一对特异性引物扩增片断的序列中；c.第一轮PCR反应：以步骤a分离得到的游离DNA为模板，以第一对特异性引物进行第一轮PCR反应；d.第二轮PCR反应：以第一轮扩增产物为模板，以第二对特异性引物进行第二轮PCR反应；e.结果判断：分别以第一轮和第二轮扩增产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，电泳图谱与阳性对照比较或者与阳性和阴性对照比较，如第二轮扩增产物出现阳性条带或两轮扩增产物均出现阳性条带则该妊娠牛的胚胎为雄性；否则，该妊娠牛的胚胎为雌性。