[发明专利]一种纤维素酶的制备方法无效
申请号: | 200910043197.6 | 申请日: | 2009-04-23 |
公开(公告)号: | CN101525606A | 公开(公告)日: | 2009-09-09 |
发明(设计)人: | 田蔚 | 申请(专利权)人: | 长沙威龙生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/42 | 分类号: | C12N9/42;C12R1/885 |
代理公司: | 长沙星耀专利事务所 | 代理人: | 宁星耀 |
地址: | 410110湖南省长沙市星沙经*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | 一种纤维素酶的制备方法,其包括以下步骤:(1)培养皿液体菌种制备;(2)三角瓶种曲培养;(3)固态厚层通风发酵培养;(4)精制提纯。本发明采用制备液体菌种、固态厚层通风发酵培养制取高活力纤维素酶,在不增加生产成本前提下,酶活力可以达到90000IU/g以上。 | ||
搜索关键词: | 一种 纤维素酶 制备 方法 | ||
【主权项】:
1.一种纤维素酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)培养皿液体菌种制备:试管斜面菌种为绿色木霉;试管培养基配方,(NH4)2SO4 0.2-0.5g,NaNO3 0.1-0.2g,K2HPO4 0.1-0.15g,MgSO4·7H2O 0.05-0.08g,琼脂1.0-1.5g,自来水99-101mL,合计总重102g;所述配料混匀后分放于培养皿,0.1MPa灭菌30-35min,备用;接种与培养:将试管斜面菌种用接种环移取一环于无菌水中,制成孢子悬浮液,接种于培养皿,置于30℃±1℃恒温培养70-72h,取出保存;(2)三角瓶种曲培养:培养基制备,培养基配方为:麸皮75-85g,米糠15-25g,(NH4)2SO4 0.25-0.35g,NaNO3 0.10-0.15g,MgSO4 0.05-0.10g,K2HPO4 0.05-0.10g,水1480-1520mL,合计总重1600g;制备:将麸皮和米糠拌匀,计算好水量,将(NH4)2SO4、NaNO3、MgSO4、MgSO4溶于水,拌入麸皮和米糠混合料(简称麸料),搅匀后,装入已灭菌三角瓶,每500mL三角瓶装湿料40-50g,0.1Mpa灭菌30-35min,冷却,备用;接种与培养:将培养皿菌种接入所述三角瓶培养基中,置于30℃恒温箱培养70-72h,长好后取出,在40℃下干燥,备用;(3)固态厚层通风发酵培养:培养基配方:麸皮70-80g,米糠15-20g,羧甲基纤维素0.15-0.2g,(NH4)2SO4 0.05-0.1g,MgSO4 0.05-0.10g,K2HPO4 0.1-0.15g,水1480-1520mL,合计总重1600g;制备:先将羧甲基纤维素、(NH4)2SO4、MgSO4、K2HPO4、MgSO4溶解于水中,调pH至4.5,拌入原料,搅拌均匀,于常压下,95-100℃杀菌1h,闷料30-40min;接种与培养:待麸料冷却至30-38℃时,将三角瓶曲种接入拌匀,以麸料重量为计算基数,接种量为0.35wt%~0.45wt%;装箱温度为30~35℃,厚度25~35cm,在整个培养过程中,控制品温30~37℃;根据整个培养过程合理使用室内循环风和新鲜风比例,控制室内相对湿度为85%-95%,培养时间40~50h,出箱后,打碎晾干,成曲纤维素酶活力在6000IU/g干粉以上;(4)精制提纯:将麸曲先经粉碎,用2.5-3.5倍重量的水在30~35℃温度下浸泡1.5-2h后,压滤,取得酶液再重复浸麸曲,再经压滤,取得酶液,用10-15%的HCl调节pH至2.9-3.1,在10-20℃下静置0.4-0.6h,静置后离心,取上层清液再将pH调至4.3-4.5,同时将酶液和酒精分别冷却至5~7℃;将酶液倒入乙醇内搅匀,使酶液浓度保持在60-65wt%,沉淀1.8-2.2h,待沉淀完全后,用离心机离心,分离沉淀,取得沉淀再用96%乙醇洗涤2~3次,在25-30℃的低温下干燥,粉碎,即得纤维素酶粉剂。
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