[发明专利]一种利用高通量测序单通道复用技术进行mRNA表达谱测定的方法

摘要

一种在适用于超高通量新一代测序的单通道复用技术，可以在单通道中同时定量多个样本mRNA表达谱：在现有的超高通量新一代测序方法(如Illumina公司的Solexa测序平台、Roche公司的454测序平台)的基础上，通过改进流程，用条码标记技术对不同的生物样本进行标记，标记后将样本等量混合，然后进行超高通量测序。通过数据分析和解码，可以在同一个通道中同时获得多个样本的mRNA表达谱的定量数据。该方法可以在高通量测序仪器的单个测序通道中同时测定2到15个生物样品的mRNA表达量。

主权项

一种在超高通量新一代测序方法中利用单个通道同时检测多个mRNA样本的方法，其特征在于：步骤1：收集多个不同的生物样本(2～15例均可)。步骤2：通过Trizol法提取总RNA。步骤3：用磁珠法回收poly A+RNA分子。步骤4：DNP II酶切，回收产物。步骤5：连接5’-接头，Mme I酶切，连接3’-接头。5’-接头或3’-接头含有条码序列。步骤6：将标记后的样本等量混合。步骤7：利用RT引物，进行反转录。然后进行PCR扩增。步骤8：进行高通量并行测序。步骤9：数据解码与分析，计算mRNA的表达谱数据。