[发明专利]生长激素受体基因作为中国草原红牛优良屠宰性状分子标记的鉴定方法及其应用

摘要

本发明属于动物基因工程技术领域，是一种生长激素受体基因作为中国草原红牛优良屠宰性状的分子标记及应用。所获得的GHR基因片段的核苷酸序列长度为489bp，是外显子10的一部分。在第289位碱基处存在有一个碱基突变，导致限制性片段长度多态性的产生。将此突变位点作为一个分子标记，通过PCR-RFLP即聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性的方法，使用限制性内切酶BstACI检测此突变位点，并将检测结果与中国草原红牛屠宰性状相关联，为中国草原红牛的选种选育提供理论基础。本发明的特点在于获得与中国草原红牛优良屠宰性状相关的GHR基因部分片段，并对该片段进行多态性分析，为中国草原红牛的标记辅助选择提供分子标记。

主权项

1、一种克隆中国草原红牛GHR基因部分序列的方法，(1)采集中国草原红牛血液，(2)从中国草原红牛血液中提取基因组DNA，(3)设计特异性引物并进行PCR扩增，(4)克隆所扩增的中国草原红牛GHR基因序列并测序，其特征是所述的设计特异性引物并进行PCR扩增，所设计一对特异引物为：上游引物：5`-CAGCAGCCCAGTGTTATC-3`下游引物：5`-GCCCTGTGGAGACTGTACTAT-3`PCR反应总体系为25微升，其中10×反应缓冲液2微升，10mmol/L dNTP 0.5微升，25mmol/L MgCl₂1.5微升，1.0umol/L的上游引物和下游引物各0.5微升，1UTaq DNA聚合酶，20-50纳克基因组DNA，最后用四馏水补足至25微升；循环程序如下：94℃预变性5分钟，94℃变性45秒，60℃复性45秒，72℃延伸45秒，共35个循环。循环之后，72℃延伸10分钟。全部反应完成后，PCR扩增产物用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测；所克隆的中国草原红牛生长激素受体基因的核苷酸序列如下：CAGCAGCCCAGTGTTATCCTAGTAGAGGAAAACAAACCAAGACCACTTCTCATTGGTGGAACTGAGTCAACTCATCAAGCTGTCCATACACAGCTCAGCAATCCAAGTTCATTGGCAAACATTGATTTTTATGCCCAGGTAAGCGACATTACACCAGCAGGAAATGTGGTCCTTTCCCCAGGCCAAAAGAATAAGACTGGGAACCCCCAGTGTGACACGCACCCAGAAGTGGTCACACCCTGCCAAGCTAACTTCATCGTGGACAACGCTTACTTCTGCGAGGTAGACCCAAAAAGTACATTGCCCTGGCCCCTCATGTCGAGGCTGAATCACACGTAGAGCCAAGCTTTAACCAGGAAGACATTTACACCACCACAGAAAGCCTTACCACTACAGCTGGGAGGTCGGGGACAGCAGAACATGTTCCAAGTTCTGAGATACCTGTCCCAGATTATACCTCCATTCATATAGTACAGTCTCCACAGGGC，其中，为此序列片段中突变位点的两种单核苷酸，该序列中只存在A或G的一种；所述的序列长度为489bp，是外显子10的一部分。