[发明专利]一种分离mRNA的纤维素磁性微米材料的制备及应用

摘要

一种分离mRNA的纤维素磁性微米材料的制备及应用。本发明采用基因工程技术将浅紫灰链霉菌的链霉亲和素基因定向克隆至含有纤维素结合域标签的pET系列载体，构建了同时具有生物素结合活性和纤维素结合活性的双功能融合蛋白CBD-SA的载体，并转入E.coli BL21感受态菌株，经IPTG低温诱导表达，获得高含量的CBD-SA融合表达蛋白。利用CBD-SA作为生物桥联剂，以生物特异性偶联法代替传统的物理吸附法和化学键合法，使纤维素磁性微米材料活化，活化后能够高效率的结合生物素化的试剂，得到可用于蛋白或核酸分离的磁性微米材料。本发明提供的纤维素磁性微米材料可用于生物样品中mRNA的分离提取等。

主权项

1、一种链霉亲和素生物活化的纤维素磁性微米材料的制备方法，其特征是它包括如下步骤：第一、取1～3g磁流体，加入到15～25mL纤维素黄胶液中，充分搅拌后采用匀浆机在3000～24000rpm条件下匀浆1～3min；向上述液体中加入3～8倍体积的有机相，有机相的组分体积比为9∶2的氯苯和四氯化碳，内含1～4％体积的司班-80，在3000～24000rpm再充分匀浆1～3min；第二、将上述匀浆液转入300～500mL上步所述的有机相中，300～500rpm机械搅拌，以50℃水浴加热，并加热至80℃，保温2～4小时；第三、弃去有机相，用无水乙醇淋洗6～8次，再用无水乙醇和水交替淋洗，最后用水充分淋洗，获得粒径为3～60μm纤维素磁性微米材料；第四、取第三步制备的纤维素磁性微米材料1mL，室温下直接加入5mL内含0.015～15mg纤维素结合域-链霉亲和素融合蛋白CBD-SA的重组pCBD-SA/E.coli BL21菌株的发酵菌体裂解液中，室温振荡反应1～3小时，或4℃过夜，然后用PBS缓冲液充分淋洗；或者，将第三步制备的纤维素磁性微米材料1mL，室温下直接与5mL内含0.015～15mg纤维素结合域-链霉亲和素双功能融合蛋白CBD-SA的溶液混合，室温下振荡反应1～3小时，或4℃过夜，将双功融合蛋白CBD-SA结合在纤维素磁性微米材料的表面，即得到链霉亲和素生物活化的磁性纤维素微米材料。