[发明专利]S100A4蛋白的纯化与鉴定

摘要

本发明公开了一种S100A4蛋白的纯化与鉴定方法。本发明采用金属螯合层析法对表达载体pBV220-S100A4的表达产物纯化后，进行SDS-PAGE鉴定和Western-Blot鉴定。为了加快纯化速度，防止蛋白在纯化过程中降解，采用GE Health HiTrap Desalting柱进行脱盐处理。

主权项

1.权利要求1所述的S100A4蛋白的纯化与鉴定，其特征在于包括如下步骤：(1)S100A4蛋白的纯化①将金属鳌合层析柱(GE Health)连接AKTA FPLC蛋白纯化仪，并以约5倍体积的结合缓冲液平衡至基线。②平衡以后，将破碎上清以结合缓冲液稀释3-5倍以0.45μm的除菌滤器过滤除菌后以3mL/min的流速上样，收集穿透液。③以结合缓冲液平衡至基线，用洗脱缓冲液进行线性梯度洗脱，以3mL/管收集A280峰，进行SDS-PAGE鉴定和纯度鉴定。(2)S100A4蛋白的脱盐采用GE Health HiTrap Desalting柱进行脱盐处理，程序参照该层析柱说明书，简言之，缓冲液为生理盐水缓冲液，平衡柱子3-5个柱床体积后，用注射器手推上样，上样过程中弃去所有的流出液，上样完毕后，将层析柱连接FPLC系统，监测A280值与电导，进行SDS-PAGE分析(3)蛋白鉴定a SDS-PAGE鉴定①将上一步骤中收集的破碎后上清液吸取25μl，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；②取破碎后的沉淀少许，加入25μl的PBS重悬后，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；③将上述两者100℃煮沸5min，并短暂离心，进行SDS-PAGE电泳，鉴定其表达形式。b Western-Blot鉴定按照常规Western-Blot法操作规程操作，以兔抗S100A4(来源：Santa clouse公司)为抗，进行鉴定所表达的S100A4蛋白。