[发明专利]一种检测厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性的方法

摘要

一种检测厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性的方法，它涉及一种检测氢化酶活性的方法。本发明解决了现有产氢氢化酶活性检测方法存在的灵敏度低，检测结果准确性差，操作复杂以及安全性差的问题。本发明检测方法按照以下步骤进行：一、样品预处理；二、恒温培养；三、加入电子载体；四、预热处理；五、酶反应；六、终止反应；七、吸取气体进行气相色谱分析，记录氢气百分含量，求出厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性。本发明检测厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性的方法操作简单，准确性好，灵敏度高，本发明方法以微毒的二甲基亚砜或无毒的甘氨酸作为电子载体，安全性好。

主权项

1、一种检测厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性的方法，其特征在于检测厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性的方法按照以下步骤进行：一、预处理：将活性污泥放入到厌氧管中，然后向厌氧管中依次加入磷酸盐缓冲液、溶菌酶、二溴乙烷磺酸钠和铁粉，再向厌氧管中充N2后密封，其中每1mL的活性污泥需要加入0.6mL、pH值为7.3～7.7的磷酸盐缓冲液、100μL的溶菌酶、0.2mL的质量浓度为2g/L的二溴乙烷磺酸钠和0.04mg的铁粉；二、恒温培养：将步骤一的厌氧管放置在36～45℃的水浴条件下培养30～50min；三、加入电子载体：将甘氨酸或者二甲基亚砜作为电子载体加入到步骤二培养后的厌氧管中，其中每1mL的活性污泥需要加入0.2mL、质量浓度为10g/L的甘氨酸或者加入0.2mL、质量浓度为0.25％的二甲基亚砜；四、预热处理：将步骤三中加入电子载体的厌氧管放置在38～42℃的恒温振荡水浴中预热处理18～25min；五、酶反应：向步骤四预热处理后的厌氧管中加入硫代硫酸钠和硫化钠溶液在室温条件下酶促反应8～12min，其中每1mL的活性污泥需要加入0.1mL、质量浓度为40g/L的硫代硫酸钠和0.1mL、质量浓度为40g/L的硫化钠；六、终止反应：向步骤五的厌氧管中加入三氯乙酸溶液终止反应，其中每1mL的活性污泥需要加入0.2mL、质量浓度为10％三氯乙酸溶液；七、吸取步骤六厌氧管中的气体进行气相色谱分析，记录氢气百分含量，按照公式求出厌氧活性污泥中产氢氢化酶活性，其中UI表示厌氧活性污泥的氢化酶活性，B表示氢气百分含量，V表示步骤五厌氧管中的气体体积，W表示步骤一中放入厌氧管中活性污泥的生物量，即每1mL活性污泥含有的挥发性悬浮固体的质量，t表示步骤五中酶反应时间。