[发明专利]大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法

摘要

本发明涉及一种大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法。其特征：集甲醇提取、酸水解于一步，删除三氯甲烷等毒害溶剂萃取、蒸干等步骤，使前处理时间由传统法的10～15小时，降低到0.5小时，高效率，低成本，少污染。通过对流动相组分及比例探讨，以乙腈-甲醇-0.1％磷酸(40～45∶20～27∶38～30)取代甲醇-0.1％磷酸(85∶15)为流动相，解决了难以辨认的大黄素包覆杂质峰难题，确保了测定结果的准确性。以大黄酚、大黄素为测定指标，采用同一流动相，同时测定制剂中的总、游离和结合蒽醌中的大黄酚、大黄素。率先使测定指标与制剂功效相结合，提高了质控指标的科学性、合理性。方法简便、快捷、准确，适用于所有含大黄的各种剂型。

主权项

1、本发明涉及一种大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法。其特征在于：(1)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1％磷酸(40～45∶20～27∶38～30)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液制备：精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含大黄酚10～50μg、大黄素5～25μg的混合溶液，即得。(3)供试品溶液制备：取样品，粉碎，精密称取一定量(约相当大黄酚1～10mg，大黄素0.5～5mg)，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(10∶1)的混合溶液20～50ml，称定重量，如为药材、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等无蜂蜜样品，置80℃的水浴中加热回流20～40分钟；如为蜜丸类样品，需浸泡10小时以上，超声使溶散，再置80℃的水浴中加热回流，放冷，若瓶壁有黏附，超声去除，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1～5ml，置5～10ml量瓶中，加2％的氢氧化钠溶液1～2ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为测定总蒽醌中大黄酚、大黄素的供试品溶液。再取上述粉碎的样品一定量(约相当大黄酚0.1～1.25mg，大黄素0.05～0.6mg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～25ml，称定重量，如为药材、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等无蜂蜜样品，超声处理(功率为160W，频率为50kHz)20～40分钟；如为蜜丸类样品，需浸泡10小时以上，玻棒研磨使样品溶散，用数滴甲醇冲洗玻棒于锥形瓶中，再超声处理(功率为160W，频率为50kHz)20～40分钟；放冷，称定重量，用甲醇补足或挥散至原重量，摇匀，滤过，取续滤液作为测定游离蒽醌中大黄酚、大黄素的供试品溶液。(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与上述二种供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定。分别计算总蒽醌中大黄酚、大黄素与游离蒽醌中大黄酚、大黄素的量，以总蒽醌中大黄酚、大黄素的量减去游离蒽醌中的大黄酚、大黄素量，即为结合蒽醌中大黄酚、大黄素的量。