[发明专利]检测线粒体ND1基因单核苷酸多态性的方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种检测线粒体ND1基因mtDNA 3970位点的SNP的方法以及检测该位点SNP的试剂盒和该试剂盒的应用。本发明方法对于样本没有特殊的限制，无论是体液和组织细胞均可作为本发明检测样本，使得检测方便简捷；本发明所设计的特异性引物对待扩增区的碱基长度无严格要求，通过本发明特异性引物可获得本发明所述的PCR产物并进行高分辨熔解曲线的分析；在PCR反应前加入饱和荧光染料，lightscanner仪器通过光学检测荧光信号变化并绘制温度熔解曲线，根据曲线可以准确区分野生型、杂合突变、纯和突变。本发明操作简便，检测成本低廉，且检测结果准确，具有很好的应用价值和市场价值。

主权项

一种检测线粒体ND1基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)提取基因组DNA；(2)线粒体ND1基因单核苷酸多态性识别：制备混合液：步骤(1)制备的基因组DNA溶液、PCR缓冲液、dNTP、Taq DNA聚合酶、PCR引物、PLUS+饱和荧光染料、C1和C2寡核苷酸内参和纯水；PCR条件：在95℃5分钟，95℃1分钟，56℃30秒，72℃3秒，72℃7分钟，进行35个循环；反应完成后，将PCR产物再进行两个变性和复性的循环，95℃变性30秒，25℃复性2分钟，共2个循环；(3)将步骤(2)制备的样本进行高分辨熔解曲线分析。