[发明专利]人羊膜上皮细胞与神经干细胞共培养诱导分化多巴胺能神经元的方法

摘要

本发明人羊膜上皮细胞与神经干细胞共培养诱导分化出多巴胺能神经元的方法包括：将人羊膜上皮细胞放置在复合培养板的上层培养室内的半透膜上，神经干细胞球放置在复合培养板的下层培养室内，上层培养室在下层培养室的上方，复合培养板内充满了神经干细胞基础培养基，人羊膜上皮细胞分泌至培养基中的生长因子通过半透膜进入到放置神经干细胞球的下层培养室中；将复合培养板放置在二氧化碳孵化箱内培养；培养数日后移走上培养室，去除放置在下培养室内的神经干细胞球、未贴壁细胞和神经干细胞基础培养基，收获上述所有细胞。本发明方法具有操作方便、成本低和得到多巴胺能神经元的比例较高的优点，并且以人源性细胞作为滋养细胞，可以避免来自动物源性及肿瘤源性细胞的病源污染，提高临床应用的安全性。

主权项

一种人羊膜上皮细胞与神经干细胞共培养诱导分化出多巴胺能神经元的方法，该方法包括以下步骤：(a)将人羊膜上皮细胞(4)种植在复合培养板的上层培养室(1)内的半透膜(3)上，神经干细胞球(5)放置在复合培养板的下层培养室(2)内，上层培养室(1)在下层培养室(2)的上方，上层培养室(1)和下层培养室(2)之间装有半透膜装置(3)，其中充满微孔，复合培养板内充满了神经干细胞基础培养基(7)，人羊膜上皮细胞(4)分泌的生长因子透过半透膜装置(3)进入到放置神经干细胞球(5)的下层培养室(2)中；(b)将上述复合培养板放置在二氧化碳孵化箱(6)内培养10-15天；(c)移走上层培养室(1)，去除放置在下层培养室(2)内的神经干细胞球(5)、未贴壁细胞和神经干细胞基础培养基(7)；(d)对收获的部分细胞进行鉴定，确认酪氨酸羟化酶阳性细胞的存在，并进行定量分析，得到了含有多巴胺能神经元样细胞的细胞；(e)收获上述所有细胞。