[发明专利]一种悬浮培养BHK21细胞生产狂犬病病毒的方法

摘要

本发明提供了一种悬浮培养BHK21细胞生产狂犬病病毒的方法，其中，所述方法包括以下步骤：在装有BHK21细胞培养基的生物反应器中悬浮培养BHK21细胞；其中，所述步骤悬浮培养的条件包括：32-36℃的温度、7.0-7.8的pH值和30-50％的溶氧浓度；所述BHK21细胞培养基包括表1所示的组分。该方法克服了现有技术的偏见，实现了在生物反应器中悬浮培养BHK21细胞来生产狂犬病病毒。收获的狂犬病病毒可以用于生产狂犬病疫苗。并且生物反应器的自动控制培养环境参数，使得细胞生长和病毒繁殖处于较优的环境，提高了病毒滴度，并且能够实现大规模自动化连续的生产。

主权项

一种悬浮培养BHK21细胞生产狂犬病病毒的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)在装有BHK21细胞培养基的生物反应器中悬浮培养BHK21细胞；其中，所述步骤1)悬浮培养的条件包括：32-36℃的温度、7.0-7.8的pH值和30-50％的溶氧浓度；所述BHK21细胞培养基包括分散剂和下表1所示的组分。表1  组分  mg/L分散剂  组分  mg/L分散剂  L-丙氨酸  80-120  四水合硝酸钙  30-80  L-精氨酸盐酸盐  180-210  氯化钾  350-500  L-天门冬氨酸  5-30  无水硫酸镁  50-80  L-天门冬酰胺  30-60  氯化钠  6000-8000  L-半胱氨酸盐酸盐  10-30  无水磷酸氢二钠  200-400  L-谷氨酸  200-250  七水硫酸亚铁  0.1-1  L-谷氨酰胺  300-500  七水合硫酸锌  0.2-3  L-组氨酸盐酸盐  20-50  D-葡萄糖  1000-3000  L-羟脯氨酸  5-15  谷胱甘肽  0.2-2  L-异亮氨酸  100-150  丙酮酸钠  20-120  L-亮氨酸  20-50  抗坏血酸  1-10  L-赖氨酸盐酸盐  100-200  氯化胆碱  5-25  L-蛋氨酸  10-50  D-泛酸钙  1-10  L-苯丙氨酸  10-50  叶酸  2-10  L-脯氨酸  20-60  烟酰胺  1-5  L-丝氨酸  20-60  盐酸吡哆醇  1-10  L-苏氨酸  60-100  核黄素  0.2-2  L-色氨酸  10-50  盐酸硫胺  1-10  L-缬氨酸  30-70  维生素B12  1-10  L-酪氨酸  30-80  六水合氯化镁  40-100  甘氨酸  30-80  次黄嘌呤  1-10  L-胱氨酸盐酸盐  30-80  胸苷  0.1-2  无水氯化钙  30-80  无水磷酸二氢钾  20-100  无水磷酸二氢钠  30-80  大豆蛋白  100-200  HEPES  300-400所述分散剂选自蒸馏水、去离子水、注射用水、重蒸水、超纯水中的一种或几种。