[发明专利]离体培养除虫菊再生植株的方法及专用培养基

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种离体培养除虫菊再生植株的方法及专用培养基。本发明的步骤如下：A.取除虫菊的种子，经灭菌和无菌离体培养得到无菌苗，选4个不同单株的无菌苗在MS基本培养基中继代培养；B.无菌苗继代培养了30d后，切取顶端幼嫩的叶片作为外植体，将其中脉划两刀后近轴面朝上接种于MS基本培养基+2.0mg/L6-BA+0.2mg/L IBA和2.0mg/L AgNO₃的专用培养基上，先暗培养再光照培养，大约30天左右获得再生芽；C.将再生芽转移至MS基本培养基中作继代培养得到完整植株。本发明取材不受季节限制，方法简便，再生周期短，除虫菊的植株再生频率为92％-96％。

主权项

1、离体培养除虫菊再生植株的方法，其步骤包括：A、以除虫菊种子为离体培养的材料，先用70％酒精对除虫菊种子进行消毒，无菌水冲洗2-3遍，再用0.1％升汞继续对除虫菊种子进行消毒，无菌水冲洗3-4遍后，将灭过菌的除虫菊的种子置于无菌滤纸上使之萌发培育成无菌苗；选取4个来自不同种子培育的除虫菊无菌苗接种于MS基本培养基为成分的继代培养基上进行继代培养；B、在无菌条件下，以A步骤的除虫菊无菌苗为材料，继代培养30d后，切取顶端幼嫩的叶片作为外植体，将其中脉划两刀后，近轴面朝上接种于MS基本培养基+6-苄氨基嘌呤2.0mg/L+吲哚丁酸0.2mg/L+AgNO3 2.0mg/L的专用培养基上，先暗培养7天后再转入光照条件下培养15-30d，得到再生芽；C、将步骤B的再生芽切下接种于MS基本培养基中继代培养，直至得到完整的再生植株；上述A、B、C各步骤所述的培养基均添加0.7％琼脂和3％蔗糖，补充蒸馏水至1L，灭菌前调培养基的pH至5.8后于121℃高压蒸汽灭菌20min，所述的培养材料均置于24-26℃，光照时间为16h/d，光强为1200lux的条件下培养。