[发明专利]诱导人胚胎干细胞或人诱导形成的多潜能干细胞向肝细胞分化的方法

摘要

本发明公开了一种诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法，该方法是将诱导形成的多潜能干细胞在分化培养基I中培养，然后再转入含有胰岛素-转铁蛋白-硒盐的分化培养基I中培养，最后在含有成纤维细胞生长因子和骨形态形成蛋白的肝细胞培养基中培养获得肝脏前体细胞，促进所述肝细胞成熟，获得肝细胞；所述分化培养基I为含有活化素A的基础细胞培养基。用本发明的诱导形成的多潜能干细胞分化成肝细胞的方法诱导人iPS细胞向肝脏细胞分化具有周期短、分化效率高、安全稳定的优点，分化获得的肝细胞可用于细胞移植治疗肝病、人工肝脏和药物的毒性测试等，此外整个分化过程也可用于人类早期胚胎肝脏发育的研究，应用前景广阔。

主权项

用于诱导人胚胎干细胞或人诱导形成的多潜能干细胞向肝细胞分化的培养基，它由分化培养基I‑1、分化培养基I‑2、分化培养基I‑3、分化培养基II、分化培养基III、分化培养基IV和分化培养基V组成；所述分化培养基I‑1是在基础细胞培养基中添加人活化素A得到的培养基，分化培养基I‑1中，人活化素A的终浓度为10‑500ng/ml；所述分化培养基I‑2是在基础细胞培养基中添加人活化素A和胰岛素‑转铁蛋白‑亚硒酸钠混合补充液得到的培养基，分化培养基I‑2中，人活化素A的终浓度为10‑500ng/ml，胰岛素‑转铁蛋白‑亚硒酸钠混合补充液的终浓度为0.01％‑0.5％(体积百分含量)；所述分化培养基I‑3是在基础细胞培养基中添加人活化素A和胰岛素‑转铁蛋白‑亚硒酸钠混合补充液得到的培养基，分化培养基I‑3中，人活化素A的终浓度为10‑500ng/ml，胰岛素‑转铁蛋白‑亚硒酸钠混合补充液的终浓度为0.5％‑20％(体积百分含量)；所述分化培养基II是在肝细胞培养基中添加人成纤维细胞生长因子和人骨形态形成蛋白得到的培养基，分化培养基II中，人成纤维细胞生长因子的终浓度为5‑100ng/ml，人骨形态形成蛋白的终浓度为5‑100ng/ml；所述分化培养基III是在肝细胞培养基中添加人肝细胞生长因子和人角化细胞生长因子得到的培养基；分化培养基III中，人肝细胞生长因子的终浓度为5‑100ng/ml；人角化细胞生长因子的终浓度为5‑100ng/ml；分化培养基IV是在肝细胞培养基中添加制瘤素M和地塞米松得到的培养基；其中，制瘤素M的终浓度为1‑100ng/ml；地塞米松的终浓度为0.05‑1μM；分化培养基V是在基础细胞培养基中添加N2，B27，谷氨酰胺，非必需氨基酸，β‑巯基乙醇，制瘤素M和地塞米松得到的培养基；分化培养基V中，N2的终浓度为0.1％‑10％(体积百分含量)；B27的终浓度为0.1％‑20％(体积百分含量)；谷氨酰胺的终浓度为0.5‑2mM；非必需氨基酸的终浓度为0.1％‑10％(体积百分含量)；β‑巯基乙醇的终浓度为0.05‑0.2mM；制瘤素M的终浓度为1‑100ng/ml；地塞米松的终浓度为0.05‑1μM。