[发明专利]用于Hum j 3检测的夹心ELISA试剂盒

摘要

本发明提供一种用于Hum j3检测的夹心ELISA试剂盒，其通过天然葎草花粉纯化主要致敏蛋白Hum j3的制备、小鼠杂交瘤单抗的制备和筛选、夹心ELISA方法两种单抗的选择、夹心ELISA方法试验条件的确定、夹心ELISA方法敏感性、特异性、线性范围、稳定性等方法学指标的确定等步骤建立夹心ELISA法。本发明试剂盒包括该方法的运用包括：捕捉抗体和检测抗体，所述捕捉抗体包被于酶标板中，所述检测抗体为酶标记抗体，所述捕捉抗体和检测抗体分别特异性地针对Hum j3的不同抗原决定簇。本发明在临床实践、变应原制药工业生产、质控与新药研发、气候与环境中Hum j3含量监测与预报中有重要的运用价值。

主权项

一种检测葎草花粉主要致敏蛋白Hum j3的夹心ELISA建立方法，其包括如下步骤：1)通过纯化主要致敏蛋白Hum j3免疫BALB/c小鼠，制备多株小鼠杂交瘤单抗；2)通过十字交叉法筛选小鼠杂交瘤的单抗，寻找最优的构建夹心ELISA方法的两种单抗的配置：首先经过单抗与特异葎草花粉主要致敏蛋白过敏的人血清IgE的竞争ELISA法分析，确定与人血清IgE的存在最大竞争抑制率的一种候选单抗；其次通过与Hum j3结合的单抗之间的相互竞争抑制ELISA的分析，确定构建夹心ELISA方法的另一种单抗；3)优化夹心ELISA方法检测葎草花粉主要致敏蛋白Hum j3的条件，包括：包被单抗浓度、葎草变应原浸液和纯化葎草花粉主要致敏蛋白的浓度稀释范围，酶标单抗的稀释浓度；4)确定夹心ELISA方法检测葎草花粉主要致敏蛋白Hum j3的各种方法学指标，包括：敏感性、特异性、线性范围、显色稳定性。