[发明专利]纤维素酶组合物以及单一成分的制备方法无效
| 申请号： | 200910094341.9 | 申请日： | 2009-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN101525608A | 公开（公告）日： | 2009-09-09 |
| 发明（设计）人： | 李文均;胡松楠;魏云林;唐蜀昆;赵立兴;姜成林;徐丽华 | 申请（专利权）人： | 云南大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12R1/01 |
| 代理公司： | 云南派特律师事务所 | 代理人： | 张 怡 |
| 地址： | 650091云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，尤其是纤维素酶组合物以及其中单一成分的制备方法。本纤维素酶组合物的制备方法为：一、粗酶液的制备：将Thermobifida halotolerans YIM 90462T以体积百分比5-10％的接种量接入液体种子培养基中，振荡培养，以体积百分比5-10％的转接于液体发酵培养基中，培养至稳定期初期，将发酵液离心，取上清液，滤纸过滤，得粗酶液；二、用截留分子量为10KDa的超滤膜包将粗酶液的体积浓缩至原来的1/6；三、浓缩后的酶液加硫酸铵至30％饱和度，继续加硫酸铵至50％饱和度，离心取沉淀，溶解在pH8.0、含有0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液中，得到的酶液为纤维素酶组合物。对本纤维素酶组合物再进行进一步的分离、提纯，可以制得其中的一种单一成分——SDS-PAGE电泳纯中温纤维素酶。该电泳纯纤维素酶的活力为68.5U/ml.本发明的优点是：所得到纤维素酶在高温下仍具有较高的酶活力，在造纸、生物转化行业有一定的工业应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 纤维素酶 组合 以及 单一 成分 制备 方法 | ||
【主权项】：
1、一种纤维素酶组合物的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：一、粗酶液的制备：将Thermobifida halotolerans YIM 90462T以体积百分比为5-10％的接种量接入液体种子培养基中，在37～45℃的条件下振荡培养至指数生长期，将处于指数生长期的菌液以体积百分比5-10％的接种量转接于液体发酵培养基中，在37～45℃培养至稳定期初期，将发酵液离心，取上清液，滤纸过滤，得粗酶液；二、用截留分子量为10KDa的超滤膜包将粗酶液的体积浓缩至原来的1/6；三、浓缩后的酶液加硫酸铵至30％饱和度，离心取上清液，继续加硫酸铵至50％饱和度，离心取沉淀，溶解在pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液中，得到的酶液为纤维素酶组合物。
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