[发明专利]一种同时提取植物DNA和RNA的方法

摘要

本发明提供了一种同时提取植物DNA和RNA的方法，所述方法利用同一份植物样本，先经相同步骤进行处理除杂后，再分别进行DNA和RNA沉淀和纯化，以达到共同提取的目的。本发明所述方法可用于山药样品中DNA和RNA的同时提取，其优点不仅在于可以同时进行核酸提取，节省时间，经济，快速，而且本发明中采用的超速离心和KAC等对山药本身所含多糖等杂质的去除非常有效，DNA/RNA提取质量高，RNA OD260/280比值间于(1.8～2.0)，DNA间于1.7～1.8之间，电泳条带完整清晰。本发明也同样适用于其他植物样本的核酸提取。

主权项

1. 一种同时提取植物DNA和RNA的方法，所述方法包括：(1)取植物样品，液氮研磨成粉，得到样品粉末；(2)将样品粉末加入预热至60～70℃的CTAB提取液，样品粉末与CTAB提取液用量为1g∶2～3mL，再加入β-巯基乙醇至终浓度为1～5％，60～70℃水浴20～40min得混合液A；(3)步骤(2)所得混合液A分别加入体积为所述混合液A体积0.2～0.3倍的无水乙醇和体积为所述混合液A体积0.1～0.15倍的pH5.3KAc缓冲液，混匀后，于60～70℃水浴5～10min得混合液B；(4)步骤(3)混合液B加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，氯仿/异戊醇混合液中氯仿与异戊醇体积比为24∶1，混匀，10000rpm以上转数离心1～2次，每次5～10min，取上清液1用于下一步操作；(5)上清液1加入等体积的水饱和酚/氯仿/异戊醇混合液，水饱和酚/氯仿/异戊醇混合液中水饱和酚、氯仿、异戊醇体积比为25∶24∶1，混匀，10000rpm以上转数离心5～10分钟，取上清液2分别进行RNA和DNA提取：(6)取1体积上清液2加入0.5～0.6体积的10M LiCl水溶液于-20℃～-10℃静置12小时以上沉淀RNA，再经分离纯化得到植物RNA；(7)另取1体积上清液2加入0.05～0.2体积的pH5.2NaAc缓冲液和2～3体积的无水乙醇，-20℃～-10℃静置30min以上，沉淀DNA，再经分离纯化得到植物DNA。