[发明专利]提高家蚕杆状病毒表达系统外源蛋白质表达水平的方法

摘要

本发明公开了一种提高家蚕杆状病毒表达系统外源蛋白质表达水平的方法。利用家蚕杆状病毒BmNPV多角体基因N-段部分基因序列，将其与外源目的基因进行融合，构建产生新的重组基因工程病毒，然后在家蚕培养细胞内进行重组蛋白质的表达，发现能够大幅度提高外源蛋白质的表达水平。利用重组病毒作为载体，感染家蚕培养细胞，在细胞内进行蛋白质的表达，感染96小时后分析蛋白质表达情况。结果表明，通过与多角体基因N-端序列的融合，外源基因的表达水平得到了提高，增加的幅度为2-3倍。与外源基因单独表达相比，显著提高了外源基因的表达水平，从而大大提高了家蚕杆状病毒表达系统的工作效率。

主权项

1、一种提高家蚕杆状病毒表达系统外源蛋白质表达水平的方法，其特征在于该方法的步骤如下：1)以家蚕杆状病毒BmNPV基因组为模板，通过PCR技术克隆多角体启动子和多角体基因Polyhedrin N-端从起始密码子ATG开始的编码50个氨基酸，即150个核苷酸的基因序列，然后通过体外连接的方法，在其C端与报告基因-绿色荧光蛋白基因EGFP进行连接，成为一个融合基因；随后将该融合基因克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacHTa，构建完成一个重组的杆状病毒供体载体；2)然后利用已经构建的适用于家蚕的杆状病毒Bac-to-Bac表达系统，其工作原理为：重组杆状病毒通过细菌转座子的基因定位转移作用，在大肠杆菌内实现基因的转移重组，获得重组病毒。3)重组病毒系统由供体质粒、含有家蚕杆状病毒BmBacmid基因组的感受态细菌DH10BmBac构成，其产生重组病毒的原理是：首先将外源目的基因克隆入供体质粒，然后将供体质粒转化入DH10BmBac感受态细胞中，通过细菌转座子的定点转位作用，将启动子和目的基因一并转入家蚕杆状病毒基因组而产生重组病毒DNA，最后转染家蚕培养细胞而获得含有目的基因重组病毒。