[发明专利]测定辣根过氧化酶的酶催化氧化纳米银-石墨炉原子吸收光谱法

摘要

本发明公开了一种测定辣根过氧化酶的酶催化氧化钠米银-石墨炉原子吸收光谱法，测定步骤为：1.先制备HRP的标准体系，用石墨炉原子吸收分光光度计测定其吸光度为A_b；2.制备不加HRP的空白对照体系，测定其吸光度为A₀；3.计算ΔA＝A_b-A₀；4.以ΔA与HRP的浓度关系作工作曲线；5.制备检测体系，加入的为含有HRP但不知浓度的被测物，并测定其吸光度为ΔA；6.根据工作曲线，求出被测物的HRP的浓度。本发明的优点是：具有较好的选择性，灵敏度高，反应条件容易达到，填补了原子吸收光谱法不能测定HRP这一空白。

主权项

1、测定辣根过氧化酶的酶催化氧化纳米银-石墨炉原子吸收光谱法，其特征是：含有如下步骤：(1)制备HRP的标准体系：在5mL的具塞刻度试管中，依次加入0.1mL pH 4.2HAc-NaAc缓冲溶液，0.2mL 3.96×10-4mol/L的H2O2溶液，0.5mL 2.4×10-4mol/L的银胶，再加入一定量的HRP，用水定容至3.0mL，混匀，室温反应6min后，倒入10mL离心管中，以24000rpm，离心20min；(2)用步骤(1)的方法制备不加HRP的空白对照体系；(3)分别吸取离心液100.0μL于2个5mL刻度试管中，稀释到2.0mL，用石墨炉原子吸收分光光度计测定其吸光度Ab，不加HRP做空白，测其吸光度A0，计算ΔA＝Ab-A0；(4)以ΔA值与HRP浓度作关系曲线；(5)依照上述步骤(1)制备检测体系，加入的为含有HRP但未知浓度的被测物，求出被测体系的ΔA；(6)依据(4)的工作曲线，根据回归方程为ΔA＝0.011c+0.12，相关系数0.9951，即可求得HRP浓度在0.84～50ng/mL范围内的浓度。