[发明专利]利用水牛EG样细胞生产转基因胚胎的方法无效
| 申请号： | 200910114182.4 | 申请日： | 2009-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN101591673A | 公开（公告）日： | 2009-12-02 |
| 发明（设计）人： | 石德顺;黄奔;陆凤花;刘庆友 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/06;C12N15/00 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 | 代理人： | 翁建华 |
| 地址： | 530004广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 一种利用水牛EG样细胞生产转基因胚胎的方法，其工艺步骤为先对水牛EG样细胞转染与筛选，再分别制作水牛转基因嵌合胚胎或水牛转基因克隆胚胎。用本发明的方法，成功获得了转基因水牛嵌合囊胚和转基因克隆囊胚，且证明60％左右的囊胚能表达外源基因，为下一步生产转基因水牛迈出了重要的一步。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 水牛 eg 细胞 生产 转基因 胚胎 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用水牛EG样细胞生产转基因嵌合胚胎的方法，其特征是制作水牛转基因嵌合胚胎的主要步骤是：(1)水牛EG样细胞的转染与筛选：传代培养两代的水牛EG样细胞用线性质粒DNA经脂质体介导转染后，用DMEM+10％胎牛血清+200μg/ml G418的培养液筛选培养6～8天，获得G418抗性的转基因细胞；然后，将G418抗性的转基因细胞在不含G418的培养液中进行扩增培养，并在荧光显微镜下检测细胞的绿色荧光蛋白GFP表达情况，将表达GFP的细胞用于转基因胚胎的生产；(2)制作水牛转基因嵌合胚胎：体外受精后第三天，将10～15个表达GFP的EG样细胞显微注射到8～16细胞阶段的水牛体外受精胚胎中，然后与颗粒细胞的单层细胞共培养4～5天，将培养获得的囊胚在荧光显微镜下检测GFP表达情况，筛选获得水牛转基因嵌合胚胎。
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