[发明专利]大肠杆菌耐热性肠毒素STI突变体(Cys→Gly)分泌型表达载体

摘要

一种大肠杆菌耐热性肠毒素ST_I突变体(Cys→Gly)分泌型表达载体，是以产肠毒素性大肠杆菌强毒株C83922所提取质粒为模板，利用引物分别进行重组PCR，扩增得到三种ST_I突变体--ST_IC10/G、ST_IC14/G和ST_IC17/G，继而将其克隆至pET-22b中，获得了相应的分泌型表达载体pESG10、pESG14、pESG17与相应的重组菌株BL21(DE3)(pESG10)、BL21(DE3)(pESG14)、BL21(DE3)(pESG17)。检测结果表明，IPTG诱导表达后的重组蛋白分子量约为14kD，且可以可溶形式表达。发明结果为进一步在蛋白质水平上阐明ST_I中Cys残基形成的3对二硫键对ST_I生物学毒性的影响，以及研究ST_I的结构与功能的关系、致病机理等奠定了坚实的基础。

主权项

1、一种大肠杆菌耐热性肠毒素STI突变体(Cys→Gly)分泌型表达载体，是以产肠毒素性大肠杆菌强毒株C83922所提取质粒为模板，利用引物分别进行重组PCR，扩增得到三种STI突变体--STI C10/G、STI C14/G和STI C17/G，继而将其克隆至pET-22b中，获得了相应的分泌型表达载体pESG10、pESG14、pESG17与相应的重组菌株BL21(DE3)(pESG10)、BL21(DE3)(pESG14)、BL21(DE3)(pESG17)。分泌型表达载体中，突变体基因核苷酸序列分别为：突变体基因STI C10/G核苷酸序列：GCT CAG GAT GCT AAA CCA GTA GAG TCT TCA AAA GAA AAA ATC ACA CTA GAA TCA AAA AAA 60A Q N A K P N E U S K N K I T L N S K K 20TGT AAC ATT GCA AAA AAA AGT AAT AAA AGT GGT CCT GAA AGC ATG AAT AGT AGC AAT TAC 120C N I A K K S N K S G P N S M N S S N Y 40TGC TGT GAA TTG TGT GGT AAT CCT GCT TGT ACC GGG TGC TAT 180C C E L C G N P A C T G C Y 60突变体基因STI C14/G核苷酸序列：GCT CAG GAT GCT AAA CCA GTA GAG TCT TCA AAA GAA AAA ATC ACA CTA GAA TCA AAA AAA 60A Q N A K P N E U S K N K I T L N S K K 20TGT AAC ATT GCA AAA AAA AGT AAT AAA AGT GGT CCT GAA AGC ATG AAT AGT AGC AAT TAC 120C N I A K K S N K S G P N S M N S S N Y 40TGC TGT GAA TTG TGT TGT AAT CCT GCT GGT ACC GGG TGC TAT 180C C E L C C N P A G T G C Y 60突变体基因STI C17/G核苷酸序列：GCT CAG GAT GCT AAA CCA GTA GAG TCT TCA AAA GAA AAA ATC ACA CTA GAA TCA AAA AAA 60A Q N A K P N E U S K N K I T L N S K K 20TGT AAC ATT GCA AAA AAA AGT AAT AAA AGT GGT CCT GAA AGC ATG AAT AGT AGC AAT TAC 120C N I A K K S N K S G P N S M N S S N Y 40TGC TGT GAA TTG TGT TGT AAT CCT GCT TGT ACC GGG GGC TAT 180C C E L C C N P A C T G G Y 60