[发明专利]一种山羊支原体山羊肺炎亚种抗原及其制备方法

摘要

一种山羊支原体山羊肺炎亚种多糖抗原，从山羊支原体山羊肺炎亚种培养物上清中提取菌体分泌多糖，经过：a支原体培养；b支原体多糖抗原的提取等工艺步骤制备而成。本发明的优越性包括以下方面：(1)本发明中抗原为从山羊支原体山羊肺炎亚种培养物上清中提取的多糖抗原，为菌体分泌多糖，具有很强的特异性，能真实地检测山羊支原体山羊肺炎亚种抗体；(2)用多糖致敏醛化-鞣酸化绵羊红细胞，避免了新鲜绵羊红细胞保存时间短、致敏效价低的缺点，易于长时间保存，血凝效价高。(3)操作简单、方便快速，无需特殊设备和仪器，适合在基层推广应用；(4)本发明是目前国内唯一的检测山羊支原体山羊肺炎抗体的诊断试剂。

主权项

一种山羊支原体山羊肺炎亚种多糖抗原，其特征在于从山羊支原体山羊肺炎亚种培养物上清中提取菌体分泌多糖，采用以下方法和步骤制备而成：a支原体培养将山羊支原体山羊肺炎亚种接种支原体培养基，37℃培养，当培养基颜色变为黄色时，pH值下降至6.8～7.0，按1∶20的体积比连续扩大培养3次，取培养物12000rpm离心30min，收获上清备用；b支原体多糖抗原的提取b.1用冰醋酸调节培养物上清pH值到5.0，煮沸60min，等冷却后用滤纸过滤，去除杂质，得到滤液；b.2将无水乙醇按2∶1的体积比加入到上一部所得滤液中混匀，置于4℃条件下过夜后，5000rpm离心20min，去上清，将沉淀物溶解于灭菌水中；加入等体积的60％苯酚，混匀，68℃水浴1h，取出置4℃条件下过夜后，6000rpm离心30min，将上清装入透析袋中，用自来水透析48h；b.3将无水乙醇按2∶1的体积比加入到透析液中混匀，置4℃条件下过夜后，7000rpm离心30min，弃上清，收集沉淀物；将沉淀物溶于灭菌水，装入透析袋中，用双蒸水透析48h，每4h换一次水；b.4取出透析袋，用电吹风或37℃温箱中通过蒸发将透析液进行10～20倍浓缩，浓缩液即为多糖抗原；用苯酚-浓硫酸法测定多糖的含量。