[发明专利]一种快速高效准确的橡胶树品种鉴定方法

摘要

本发明公开了一种快速高效准确的橡胶树品种鉴定方法，其是依据SSR标记具有多态性高、重复性好等特性，在橡胶树品种DNA水平上产生多态性的DNA指纹图谱的特性，通过比较分析，从中筛选出各品种的特异性DNA指纹图谱，建立各品种的特征指纹库，从而将各品种逐一区分开，其过程包括：1)品种标准指纹图谱库的建立；2)品种检测与鉴定。本发明工艺过程简单，通过绘制橡胶树品种的DNA指纹图谱，建立了一种快速、简便、准确的基于DNA水平的橡胶树品种鉴别方法，可用于进行橡胶树品种鉴别，解决生产中品种鉴定难的问题，并能对橡胶树品种进行知识产权保护提供依据。

主权项

1、一种快速高效准确的橡胶树品种鉴定方法，其特征在于：其步骤如下：1)、品种标准指纹图谱库的建立①、分别用5对SSR引物(rbm24、rbm36、rbm50、rbm55、rbm73)对全部135个橡胶树品种进行PCR扩增，在ABI3730基因分析仪上对扩增产物进行检测，获得各品种对应于每个SSR位点的各个等位位点的带型分布，并对每条带进行编号；所述引物序列为：rbm24F：atctgcataatagttgtaaccacarbm24R：agctctcatcatagtgaagttctggrbm36F：catctccacc acctacarbm36R：aggagagcaa taaccaacrbm50F：atcaagcaaa gaaacctcrbm50R：gtaagtgctc aacctctgtrbm55F：tatggctatgttctgctatgcrbm55R：ggactcttga tgattttggttrbm73F：tcggttggtttaccatgacarbm73R：acatcacatgagtgtatctgatctc②、依据引物在所有品种中的多态性指数高低将5个引物进行排序，5对引物的排列顺序为：rbm36＞rbm24＞rbm55＞rbm50＞rbm73；③、分别分析各引物在所有品种中的扩增带型，建立40个品种的特异指纹图谱，将这些品种与其它品种区分开；④、选取多态性较强的引物rbm36和rbm24形成引物组合，分析这一引物组合在剩余的95个品种中的带型，可建立55个品种的特异指纹图谱，将这些品种与其它品种区分开；⑤、选取引物rbm36、rbm24和rbm55形成引物组合，分析这一引物组合在剩余的40个品种中的带型，可建立31个品种的特异指纹图谱，将这些品种与其它品种区分开；⑥、选取引物rbm36、rbm24、rbm55和rbm50形成引物组合，分析这一引物组合在剩余的9个品种中的带型，可建立6个品种的特异指纹图谱，将这些品种与其它品种区分开；⑦、选取引物rbm36、rbm24、rbm55、rbm50和rbm73形成引物组合，分析这一引物组合在剩余的3个品种中的带型，可建立这3个品种的特异指纹图谱，将这3个品种与其它品种区分开；⑧、将用5个引物建立的135个品种的特异指纹图谱作为品种的标准指纹图谱，形成标准指纹图谱库；2)、品种检测与鉴定①、提取待测品种的DNA，分别用rbm24、rbm36、rbm50、rbm55、rbm73引物进行扩增，在ABI3730基因分析仪上对扩增产物进行检测，获得待测品种的扩增带型；②、分析单个引物在待测品种中的带型，并在标准指纹图谱库中检索，如果待测品种的带型与标准库中的某一带型相同，则认定待测品种与标准库中的某一品种相同；如果未检索到相同带型，则进行下步操作；③、分析rbm36和rbm24引物组合在待测品种中的带型，并在标准指纹图谱库中检索，如果待测品种的带型与标准库中的某一带型相同，则认定待测品种与标准库中的某一品种相同；如果未检索到相同带型，则进行下步操作；④、分析rbm36、rbm24和rbm55引物组合在待测品种中的带型，并在标准指纹图谱库中检索，如果待测品种的带型与标准库中的某一带型相同，则认定待测品种与标准库中的某一品种相同；如果未检索到相同带型，则进行下步操作；⑤、分析rbm36、rbm24、rbm55和rbm50引物组合在待测品种中的带型，并在标准指纹图谱库中检索，如果待测品种的带型与标准库中的某一带型相同，则认定待测品种与标准库中的某一品种相同；如果未检索到相同带型，则进行下步操作；⑥、分析rbm36、rbm24、rbm55、rbm50和rbm73引物组合在待测品种中的带型，并在标准指纹图谱库中检索，如果待测品种的带型与标准库中的某一带型相同，则认为待测品种与标准库中的某一品种相同；如果未检索到相同带型，则认定待测品种为新品种，可将其带型收入标准指纹图谱库中。