[发明专利]一种利用光纤生物传感器快速检测乳制品中β-内酰胺酶的方法

摘要

本发明公开了一种利用光纤生物传感器快速检测乳制品中β-内酰胺酶的方法，涉及一种光纤生物传感器，其包括光学系统、电子学系统、数据采集系统及控制与处理系统，其还包括光纤和传感器，其中光纤材料为聚苯乙烯，传感器上设有敏感膜，敏感膜上含有利用戊二醛固定的Cy5标记的β-内酰胺酶单克隆抗体。该单克隆抗体通过以β-内酰胺酶为抗原免疫小鼠，细胞融合等过程制备。本发明具有高灵敏度、抗电磁辐射、抗电子频率干扰、抗腐蚀性，且仪器体积小，方便携带，所需检测样品少，响应时间快，易于操作和成本低廉等优点。可广泛用于液态牛奶、奶粉、固体样品等乳制品中β-内酰胺酶的检测。

主权项

1.一种利用光纤生物传感器快速检测乳制品中β-内酰胺酶的方法，其步骤为：(1)β-内酰胺酶抗体的制备取β-内酰胺酶100μg、卡介苗5mg，与等体积佛氏完全佐剂研磨后注入6周龄雌性BALBPC小鼠腹腔，以后采用佛氏不完全佐剂，隔周腹腔注射5次，融合前3天腹腔注射50μg β-内酰胺酶标准溶液，以50％PEG4000为融合剂，将小鼠脾细胞与NS1细胞融合，IMDM2HAT选择培养，2周后换HT培养液培养。以β-内酰胺酶为抗原，经间接ELISA法筛选阳性克隆后的杂交瘤细胞，所得细胞株继续扩增培养。将阳性细胞株注入BALBPC小鼠腹腔，诱生腹水，用兔抗鼠免疫球蛋白及琼脂双扩散法检测β-内酰胺酶抗体。(2)包被抗体的制备用包被液将β-内酰胺酶抗体稀释至一定浓度并装入毛细管中，将光纤插入，4℃孵育12～16h，4℃保存备用。(3)标记抗体的制备将所测标本的抗体用稀释液稀释到一定浓度，在碱性环境下与荧光素染料Cy5结合后，通过凝胶过滤分离到标记了Cy5的单克隆抗体。(4)固定抗体的制备将通过三氨基丙基三乙基硅烷等硅烷类物质将光纤表面硅烷化，然后借助双功能交联剂戊二醛将标记了Cy5的β-内酰胺酶单抗进行固定。(5)标准曲线的制作将标记了Cy5的β-内酰胺酶单抗固定到活化器上，放入光纤生物传感器，取一定量的不同浓度的β-内酰胺酶标准溶液滴加到传感器敏感膜上，再将传感器插入到系统接口中，按下测试键，响应一段时间，约300s后，将检测结果进行显示和保存。记录不同浓度的β-内酰胺酶标准溶液所对应的光信号值，制作标准曲线。(6)样品的检测取一定量的待测样品滴加到传感器敏感膜上，再将传感器插入到系统接口中，按下测试键，响应一段时间，待数据稳定后，记录并保存测得信号值，对照β-内酰胺酶标准曲线，得出样品中β-内酰胺酶的含量。