[发明专利]海南粗榧种胚培养育苗方法

摘要

本发明海南粗榧种胚培养育苗方法，涉及一种植物的快速繁育方法。按照下述步骤进行：(1)外植体的采集与选择；(2)种子的洗净、灭菌与种胚获取；(3)种胚接种与培养；(4)试管苗继代与诱导生根；(5)驯化移栽。本发明首创了用海南粗榧种胚作外植体组培快繁的整套方法，并提供了海南粗榧种胚育苗的优良培养基，不仅可以生产整齐一致的优质海南粗榧幼苗，为解决珍稀濒危植物海南粗榧快繁和恢复保护与资源开发利用提供技术保障；也为进一步探索海南粗榧的基因工程、拓宽外植体材料等莫定了基础。

主权项

1、海南粗榧种胚培养育苗方法，其特征在于按照下述步骤进行：(1)外植体的采集与选择：采集并选择发育成熟的种子；(2)种子的洗净、灭菌与种胚获取：将成熟种子冲水1-3h.，并用蒸馏水清洗干净，滤纸吸干后放入0.5-2.0％次氯酸钠溶液中真空抽滤灭菌3-8min，然后无菌水反复冲洗3-6次；在无菌操作台上，利用已灭菌解剖显微镜用剪刀及小镊子剥去种壳并用刀尖挑取种胚；或者将灭菌好的种子直接转入以下第(3)步；(3)种胚接种与培养：将获得的海南粗榧种胚或者灭菌好的种子接种到如下培养基上培养：0.5-1Murashige and Skoog Stock培养基+0.01-0.1mg·L-1 6-苄基嘌呤+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+1-5％椰子乳，pH值5.0-6.0；暗培养2d后再置于光照周期16h·d-1、光照强度2000-3000Lux的冷光灯下、环境温度25±2℃中继续培养15-25d，即可获得新绿色的生有根的试管苗；(4)试管苗继代与诱导生根：将该生根的试管苗去根后在以下培养基上进行继代培养：0.5-1Murashige and Skoog Stock培养基+0.1-2.0mg·L-1 6-苄基嘌呤+0.01-0.2mg·L-1萘乙酸+0-100mg-L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+0.1-0.5％活性炭，pH值5.0-6.0；每3-5周继代一次，经2-4次继代，即可转入以下培养基上诱导植株生根：0.5-1Murashige and SkoogStock培养基+5.0-10.0mg·L-1 3-吲哚丁酸+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖，pH值5.0-6.0；(5)驯化移栽：将生根良好的幼苗移至驯化室、光照强度20000Lux、驯化1-2周，将苗从试管取出，用温水冲洗苗根部培养基，再用冷水冲洗，移栽至以体积比计为椰糠∶河沙＝1-3∶1或蛙石∶珍珠岩∶泥炭＝1-3∶1-3∶1混合而成的盆装人工基质中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天将袋子剪一小口，9-12天去盆苗透明塑料袋移至温室培养；1-2周后分别移入花盆或装袋制成袋苗，其基质为从野外海南粗榧群落收集的土壤及地表腐殖质∶椰糠按1-3∶1体积比例混合而成，再培养1-2周，即可转入室外大棚培养生长。