[发明专利]一种提高红掌愈伤组织快速分化成芽的方法

摘要

一种提高红掌愈伤组织快速分化成芽的方法，涉及红掌组培苗培育方法。包括如下步骤：A、选用目前较难诱导出愈伤组织或其愈伤组织较难分化成不定芽的红掌品种作为作种的红掌品种；B、在制种前一周停浇水、肥、药，保持叶面干净；C、选择刚展开而未转色的叶片作为外植体材料；D、愈伤组织的诱导；E、不定芽的分化。本发明通过在红掌愈伤诱导和芽分化的不同关键阶段运用不同的培养基配方和不同切割工艺，从而达到快速诱导和分化成芽的目的，该发明的运用有效地建立了难以开发的红掌品种的无性系，利于红掌不同品种试管苗工厂化生产的开展。

主权项

一种提高红掌愈伤组织快速分化成芽的方法，其特征在于包括如下步骤：A、选用目前较难诱导出愈伤组织或其愈伤组织较难分化成不定芽的红掌品种作为作种的红掌品种，包括：深色水晶花烛(A.andraeanum‘Clavinervium’)、观叶花烛(A.andraeanum‘Jungle King’)、通红火鹤(Anthurium scherzerianum)、大哥大(A.andraeanum‘Dakota’)、热情(A.andraeanum‘Tropical’)、塔妮斯(A.andraeanum‘Tenessee’)、橙恋(A.andraeanum‘Feroza’)、孖宝(A.andraeanum‘ZiBao’)、绿翡翠(A.andraeanum‘Casparo’)、粉佳人(A.andraeanum‘Texana’)、格莱佛火鹤(A.andraeanum‘Graffity’)；B、对所述作种的红掌品种在制种前一周停浇水、肥、药，保持叶面干净；C、选择刚展开而未转色的叶片作为外植体材料；D、愈伤组织的诱导：(1)采回的所述叶片，在自来水下冲洗干净，并用湿脱脂棉花蘸按重量计的0.5％的洗衣粉水轻擦上下表面，再在自来水下冲洗干净5～10分钟；在洁净工作台上，将所述叶片切割成2cm×2cm大小的小块叶片，并放入0.10％升汞溶液中进行浸泡消毒8～10分钟，并不断摇动；然后将所述小块叶片取出，在无菌水中漂洗4～5次，每次5～6分钟；后浸入无菌水中备用；(2)将消毒好的所述小块叶片切除边缘受升汞毒害的部分，并将所述小块叶片切割成1cm×1cm大小的叶片切块，转入诱导愈伤形成的培养基中，叶面朝上平放在培养基上；每瓶3～5片；诱导愈伤培养基为：1/3MS+2，4-D 0.5～1.0mg·L-1+6-BA1.0～2.0mg·L-1+白糖3％+琼脂粉0.6％，pH 5.8～6.0；所述1/3MS即NH4NO3、KNO4、MgSO4.7H2O、KH2PO4用量为MS培养基正常用量的1/3，其它元素用量不变；2，4-D即2，4-二氯苯氧乙酸；6-BA即6-苄氨基嘌呤；(3)培养条件：黑暗，温度24～26℃，培养时间30～60天；E.不定芽的分化：(1)当作为外植体的所述叶片切块的边缘产生1mm大小的黄色颗粒状愈伤组织块时，立刻将带有所述愈伤组织块的所述叶片切块转入一级分化培养基中，一级分化培养基为1/2MS+6-BA0.2～0.5mg·L-1+KT 0.3～0.5mg·L-1；培养条件为：光照强度12.5～19μmol·m-2·s-1，光照时间14h·d-1，温度为24～26℃；培养周期40～50天；1/2MS即NH4NO3、KNO4、MgSO4.7H2O、KH2PO4用量为MS培养基正常用量的1/2，其它元素的用量不变；6-BA即6-苄氨基嘌呤；KT即6-糠氨基嘌呤；(2)当所述叶片切块上的所述愈伤组织块转绿并增大到3～4mm的颗粒时，将所述愈伤组织块切下，转入二级分化培养基中，二级分化培养基为1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1，培养条件为：光照强度12.5～19μmol·m-2·s-1，光照时间14h·d-1，温度为24～26℃；培养周期40～50天；1/2MS即NH4NO3、KNO4、MgSO4.7H2O、KH2PO4用量为MS培养基正常用量的1/2，其它元素的用量不变；6-BA即6-苄氨基嘌呤；KT即6-糠氨基嘌呤；(3)当所述愈伤组织块在二级分化培养基上培养40～50天时，部分颗粒状的愈伤组织顶端开始有不定芽产生；将已经产生不定芽的团块切下，接种到芽增殖培养基中，增殖培养基为1/2MS+6-BA 0～0.8mg·L-1+KT 0～0.8mg·L-1；每30～40天继代培养一次；未产生不定芽的愈伤团块则继续在二级分化培养基中进行培养；1/2MS即NH4NO3、KNO4、MgSO4.7H2O、KH2PO4用量为MS培养基正常用量的1/2，其它元素的用量不变；6-BA即6-苄氨基嘌呤；KT即6-糠氨基嘌呤；(4)根据增殖培养基中不定芽的所述团块的生长情况，对所述增殖培养基进行适当的调整；增殖系数超过3.0，并且植株较细小时，说明繁殖速度过快，易于产生变异或不利于小芽的生长，这时可将6-BA浓度降低为0.2mg·L-1以下及KT的浓度降为0.2mg·L-1以下，或加活性炭1g·L-1；当不定芽增殖速度减慢而达不到所需的增殖速度时，可将6-BA浓度提高为0.5mg·L-1以上及KT的浓度提高为0.5mg·L-1以上；如此反复，可获得较理想的不定芽增殖效果。