[发明专利]上转荧光定量AFP免疫层析试纸的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种AFP免疫层析试纸的制作方法，具体为一种上转荧光定量AFP免疫层析试纸的制作方法，以及这种AFP免疫层析试纸的应用。1)上转荧光颗粒的表面硅化；2)上转荧光颗粒的表面氨基化；3)上转荧光颗粒表面连接抗体；4)上转荧光定量AFP免疫层析试纸的制作；5)样品检测及定量检测方法的建立。本发明通过上转荧光标记和双抗夹心免疫层析技术定量检测血清中AFP的含量。建立AFP上转荧光免疫层析技术，用于原发性肝癌的早期诊断，具有灵敏性高，准确性好，可实现定量分析等优势，将进一步拓展AFP免疫层析技术在生物医学领域中的应用。

主权项

1、一种上转荧光颗粒-抗体复合物的制备方法，其特征在于：具体步骤为：(1)上转荧光颗粒的表面硅化取5-50mg上转荧光颗粒，加入到300-800mL乙醇与水的混合反应液，超声处理使反应体系混合均匀，在15-50℃水浴中搅拌至平衡，再向其中加入0.1-1mL正硅酸乙酯(TEOS)，继续反应3-10h，离心洗涤；(2)上转荧光颗粒的表面氨基化取上述表面硅化的上转荧光颗粒，加入30～100mL甲醇和丙三醇组成的混合溶液，超声分散，然后向其中加入10-1000uLAEAPS，15-50℃恒温下搅拌5～10h，用乙醇离心洗涤，干燥保存；(3)上转荧光颗粒表面连接抗体向分散在磷酸缓冲液(PB)中的表面修饰氨基的上转荧光颗粒中加入一定量戊二醛，反应2-5h，离心将多余的戊二醛洗去，重新分散在PB中，然后加入一定量的抗体，4℃过夜，离心洗涤，最终保存在PB(含0.1％BSA，0.1％Tween20)中。