[发明专利]一种分离脐带间充质干细胞的方法

摘要

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种快速充分获得脐带间充质干细胞的方法。本发明将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；随后用胶原酶NB4和透明质酸酶消化脐带碎块，并在乙二胺四乙酸磷酸盐溶液中置于摇床振荡；用100-200目滤网过滤，收集滤过液；最后以600g离心5-10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2-3次，即获得脐带间充质干细胞。本发明可以在短时间内获得大量脐带间充质干细胞。且经过实验证实，获得的脐带干细胞表达干细胞的特异性标记，能够向脂肪、骨、软骨等诱导分化。

主权项

一种分离脐带间充质干细胞的方法，其特征是，该方法包括下述步骤：(1)将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；(2)将步骤(1)中获得的脐带碎块，加入2‑4倍于碎块量体积的质量/体积比为0.1‑0.2％胶原酶NB4消化，消化温度为37℃，在摇床中振荡消化2‑3小时；得混合物1；(3)将步骤(2)得到的混合物1中，加入其体积1/4‑1/2量的质量体积比为0.1‑0.2％的透明质酸酶，37℃消化10‑30分钟；得混合物2。(4)将步骤(3)得到的混合物2中，加入等体积的质量体积比为0.01‑0.02％乙二胺四乙酸磷酸盐溶液，37℃摇床振荡10‑20分钟；得混合物3。(5)将步骤(4)得到的混合物3，用100‑200目滤网过滤，收集滤过液。(6)将步骤(5)收集的滤过液以600g离心5‑10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2‑3次，即获得脐带间充质干细胞。