[发明专利]大菱鲆荧光标记微卫星六重PCR家系识别方法

摘要

一种大菱鲆荧光标记微卫星六重PCR家系识别方法，利用三种荧光(6FAM，HEX和NED)对六对引物根据其PCR扩增产物大小进行了两两标记；利用引物设计软件排除这六对引物在PCR反应过程中形成二聚体的可能，组合这六对引物于同一个PCR反应体系中，反应体系中包括ROX荧光分子内标；调整PCR反应体系，建立这六对引物可在同一个PCR反应体系中同时扩增的参数和合适的PCR反应程序；PCR产物经ABI3130或类似基因分析仪根据荧光标记进行大菱鲆六个微卫星位点分析。此六重PCR技术可提高大菱鲆微卫星标记的检测效率，单亲排除率为99.63％，个体识别力99.99％，可以对大菱鲆不同家系进行区分或者进行个体间及亲子之间的识别和鉴定。

主权项

1、一种大菱鲆荧光标记微卫星六重PCR家系识别方法，其特征在于它的方法是：利用三种荧光6FAM，HEX和NED对六对引物根据其PCR扩增产物大小进行了两两标记；利用引物设计软件排除这六对引物在PCR反应过程中形成二聚体的可能，组合这六对引物于同一个PCR反应体系中，反应体系中包括ROX荧光分子内标；调整PCR反应体系，建立这六对引物可在同一个PCR反应体系中同时扩增的参数和合适的PCR反应程序；PCR产物经ABI3130或类似基因分析仪根据荧光标记进行大菱鲆六个微卫星位点分析，相同荧光标记的产物通过片段大小进行判断，对大菱鲆不同家系进行区分或者进行个体间及亲子之间的识别和鉴定；所述的六对微卫星引物序列是：YSKr01正向序列为(5‘-3’)CGAGTCAACAGCCATCAAGC，反向序列为(5‘-3’)：AGGTGGTGGACCGTTCAAGT；YSKr02正向序列为(5‘-3’)TCGTTGCCGTAGAAACCATC，反向序列为(5‘-3’)：CTGTCTGGAGCCCAAACCT；YSKr19正向序列为(5‘-3’)TTGTGGTGCTGTGAATGTGTG，反向序列为(5‘-3’)：AGTGTTATGATATGTGGAGGC；YSKr29正向序列为(5‘-3’)GCCTTGCTGTGATTCTTTG，反向序列为(5‘-3’)：AGTGCTGCTTGTCTCTTGTG；YSKr39正向序列为(5‘-3’)GAGGGTTGTTATTGTGGAG，反向序列为(5‘-3’)：GAGGACAAAGTGACGACG；YSKr61正向序列为(5‘-3’)CACCTCACTGCCCACTGA，反向序列为(5‘-3’)：TCTGGATGTTTCTCTGACTT。