[发明专利]一种中药大青叶的质量检测方法

摘要

本发明提供了一种中药大青叶的质量检测方法，经水提取，乙醇处理，乙酸乙酯和水饱和正丁醇依次萃取、浓缩、定容等样品前处理手段将中药大青叶处理后，通过电喷雾质谱得到中药大青叶的指纹图谱；利用高效液相色谱法测定中药大青叶中核苷和嘌呤类成分的含量；利用紫外-可见分光光度法测定中药大青叶中总黄酮的含量，综合其指纹图谱及含量测定数据，可以对中药大青叶的质量进行评价，该质量检测方法准确、快捷、方便、有效。

主权项

一种中药大青叶的质量检测方法，其特征在于步骤和条件如下：(1)供试样品溶液的制备以大青叶为原料，称取大青叶药材饮片2-10g，加40-200mL水分别煎煮两次，每次1h，过滤，合并滤液，加入滤液的3倍体积的乙醇，搅匀，静置24h，过滤，减压浓缩并干燥，得到大青叶水提取物，将得到的大青叶水提取物加25-100mL水使溶解，加入25-100mL乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩并干燥，残渣以50％(V/V)甲醇溶解并定容至10mL摇匀，即为供试品溶液1；萃取后的部分加入25-100mL水饱和正丁醇分别萃取3次，合并水饱和正丁醇萃取液，减压浓缩并干燥，残渣以60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，即为供试品溶液2；(2)供试样品的电喷雾指纹图谱样品的电喷雾指纹图谱通过如下步骤得到：取5-10μL供试品溶液1，用甲醇稀释至100-500μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：大气压化学电离源，正离子电离方式，放电电流为4.0-5.0μA，气化温度350-450℃，流动注入泵进样流速3-8μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-300范围内，存在m/z120、m/z146、m/z149、m/z163、m/z181、m/z187、m/z239、m/z249、m/z263和m/z279离子；(3)核苷和嘌呤类成分含量测定高效液相色谱实验条件如下：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：20-35℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为90∶10-95∶5；洗脱时间：15-30min；紫外检测器检测波长：230-280nm；样品进样量：5-20μL；核苷和嘌呤类成分含量测定方法如下：分别精密称取1mg的标准对照品：胞苷、腺嘌呤、尿苷、尿苷和腺苷，加60％(V/V)乙醇定容至10mL容量瓶中，配成标准对照品溶液；高效液相色谱测定：各标准对照品溶液分别以2、4、6、8、10μL进样，测得各标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品含量为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对供试品溶液2进行高效液相色谱测定，得到各标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲线测得供试品溶液2中各标准对照品的含量，并结合供试品2的质量与原生药材的质量的比例，经计算得到各标准对照品的含量为胞苷0.27-0.30mg/g、腺嘌呤0.10-0.12mg/g、尿苷0.54-0.57mg/g、鸟苷0.31-0.34mg/g、腺苷0.27-0.30mg/g；(4)总黄酮含量测定总黄酮含量测定方法：精密称量20mg芦丁对照品，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL容量瓶中，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入5％(m/V)亚硝酸水钠溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入10％(m/V)硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入4％(m/V)氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液，于490-510nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标做线性回归。得到芦丁对照品的标准工作曲线和线性回归方程，然后根据供试品溶液2的吸光度和得到的芦丁对照品的标准工作曲线，测得供试品溶液2中总黄酮的含量。根据供试样品2的质量与原生药材质量的比例，通过计算得到中药大青叶中总黄酮的含量以芦丁计为3.63-3.85mg/g，完成一种中药大青叶的质量检测方法。