[发明专利]一种抗黄曲霉花生种皮RNA提取与荧光定量PCR检测方法无效
| 申请号： | 200910223727.5 | 申请日： | 2009-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN101724626A | 公开（公告）日： | 2010-06-09 |
| 发明（设计）人： | 单世华;刘宇;李春娟;万书波;闫彩霞;张廷婷 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 一种抗黄曲霉花生种皮RNA提取与荧光定量PCR检测方法，它涉及一种抗黄曲霉花生种皮RNA提取与荧光定量PCR检测方法。1、裂解液预冷，离心管置于冰上；2、液氮预冷研钵后，取花生种皮于研钵中充分研磨至粉末；3、冰浴10min在4℃，12000rpm条件下离心15min后取上水相(千万不可吸到杂质)；4、1/2体积的10M的LiCL和0.1倍体积异丙醇混匀-20℃沉淀过夜；提取的RNA质量好，可用于大量提取花生种皮RNA，且可用于荧光定量PCR。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 黄曲霉 花生 种皮 rna 提取 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种抗黄曲霉花生种皮RNA提取与荧光定量PCR检测方法，其特征在于1、于冰上5mL离心管中加入预冷1mL(可以多加)裂解液(964μL裂解液+36μL巯基乙醇)；2、从液氮中迅速取出适量(两到三个花生的种皮即可)花生种皮在液氮中充分研磨至粉末，倒入0.1g的粉末至离心管中，充分涡旋使之混匀；3、加入0.1mL 2MNaAc(pH4.0)混匀，加入1mL水饱和酚，充分振荡使之混匀，加入0.4mL的氯仿/异戊醇(49∶1)剧烈震荡混匀；4、冰浴10min后在4℃，12000rpm条件下离心15min；取上水相(千万不要吸到杂质)，加入到另外处理好的离心管中；5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)抽提，充分震荡混匀。重复4和5直至蛋白消失；6、冰浴10min后在4℃，12000rpm条件下离心15min；取上水相(千万不要吸到杂质)，加入到另外处理好的离心管中；7、加入1/2体积的10M的LiCL(最终浓度为2.5M)和0.1倍体积异丙醇混匀；-20℃沉淀过夜后4℃，12000rpm条件下离心20min；8、沉淀溶于300μLDEPC水(可适量增加)，加入0.1倍体积5MNaAc(pH5.2)和1倍体积异丙醇，-20℃沉淀30min以上后4℃，12000rpm条件下离心15min(若有沉淀，可继续步骤6，LiCL不用再次加)；9、70％乙醇洗涤沉淀2次，每次静置2min，4℃，12000rpm条件下离心5min，室温晾干5min；沉淀溶于30μLDEPC水，分装后检测，-80℃保存。
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