[发明专利]纳米磁性载基因热控释脂质体的制备工艺

摘要

纳米磁性载基因热控释脂质体的制备工艺涉及一种治疗癌症的药物尤其涉及一种纳米磁性载基因热控释脂质体的制备工艺。将硫酸锰、硫酸锌、硫酸亚铁按一定比例粉碎成末，并用氢氧化钠水溶解，经搅拌、干燥、焙烧等步骤得到锰锌铁磁性纳米粒子。得到的锰锌铁磁性纳米粒子用适量聚乙烯亚胺修饰，再与绿色荧光蛋白表达质粒结合得到载基因锰锌铁磁性纳米粒子。在茄形瓶中加入适量二棕榈酰磷脂酰胆碱和胆固醇并用氯仿和无水乙醚溶解，之后将茄形瓶置于旋转蒸发器中蒸发使瓶底形成一均匀薄膜，再加入含有载基因锰锌铁磁性纳米粒子的磷酸盐缓冲液，电动搅拌至薄膜脱落，加甘油反复冻融即得纳米磁性载基因热控释脂质体。

主权项

一种纳米磁性载基因热控释脂质体的制备方法，其特征在于：第一步：将硫酸锰MnSO4·H2O、硫酸锌ZnSO4·7H2O、硫酸亚铁FeSO4·7H2O按摩尔比1∶1∶4混合得到组合物，置于电动粉碎机中粉碎成末，然后按照所述组合物中的金属离子与氢氧化钠NaOH摩尔比1∶2.4称取氢氧化钠并用蒸馏水溶解，再将氢氧化钠水溶液加入到粉末中并用电动搅拌机搅拌三小时，静置12小时后置80℃烤箱中干燥，再置马弗炉内400℃焙烧1小时，冷却后将材料研细成粉末状，用50～60℃蒸馏水浸洗6～8次以去除可溶性硫酸钠无机盐，之后用无水乙醇淋洗，60℃烘干，得锰锌铁磁性纳米粒子MZF-NP，第二步：用浓度为5g/l的草酸溶液将锰锌铁磁性纳米粒子配成质量分数为4％的磁流体混悬液，超声分散后离心弃上清液，并将离心后的锰锌铁磁性纳米粒子加入到磷酸盐缓冲液中，边超声边加入0.2倍锰锌铁磁性纳米粒子质量的聚乙烯亚胺PEI充分混匀，再超声1小时，磁力搅拌2小时，使反应充分形成稳定的聚乙烯亚胺/锰锌铁纳米粒子(PEI/MZF)，分别用蒸馏水、乙醇反复洗涤6次，干燥后将聚乙烯亚胺/锰锌铁纳米粒子与绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP充分混合，室温放置30分钟，得载基因锰锌铁磁性纳米粒子，第三步：二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比5∶3混合置于茄形瓶中，并加入二棕榈酰磷脂酰胆碱中脂质成分10倍体积的氯仿和无水乙醚的混合液，氯仿和无水乙醚体积比为2∶1，超声3分钟使其完全溶解，用薄膜旋转蒸发器在42℃下恒温真空旋转蒸发，直到有机溶剂完全挥发，在茄形瓶内壁形成一均匀薄膜；在磷酸盐缓冲液中加入0.4～0.5倍DPPC与胆固醇总质量的明胶，在60℃±5℃水浴中待明胶溶解后加入1.5～2倍DPPC与胆固醇总质量的载基因锰锌铁磁性纳米粒子，室温超声处理3～5分钟，形成混悬液，将此混悬液加到上述含薄膜的茄形瓶中，电动搅拌震荡至薄膜脱落，转速为2000转/分，再加甘油1ml，混匀，置于-20℃中冷冻1～2小时，37℃融化，超声处理30秒后再置于-20℃中1～2小时，如此反复冻融及超声处理3次即得纳米磁性载基因热控释脂质体。