[发明专利]一种抗流感病毒药物筛选模型及其应用

摘要

本发明涉及一种用于抗流感病毒药物筛选模型与方法及应用，特别涉及一种流感病毒RNA聚合酶抑制剂筛选模型及其应用；本发明的目的是这样实现的，它利用甲型流感病毒4个聚合酶(PB1，PB2，PA和NP)基因的转录活性，将上述4个RNA聚合酶基因与报告基因共同转染细胞后使报告基因在细胞内转录表达，然后利用荧光显微镜等荧光检测仪器检测其转录产生的荧光报告基因的发光强度或通过间接检测报告基因作用底物的变化来筛选抗流感病毒药物的方法；本发明以流感病毒感染和生活周期肩负重要功能、又相对稳定的RNA聚合酶作为抗流感病毒新型药物筛选模型，有望开发出高效、低毒、副作用小的破坏酶结构或抑制酶活性的新型的抗流感病毒新药。

主权项

一种抗流感病毒药物筛选模型，其特征在于按如下步骤制备：A、通过将含甲型流感病毒4个RNA聚合酶相关基因(PB1、PB2、PA和NP)分别插入pHW2000双向转录真核表达载体BsmBI酶切位点，构建具有流感病毒RNA聚合酶活性的真核质粒pHWPB2、pHWPB1、pHWPA和pHWNP；B、按如下引物PCR扩增报告基因反向插入上述pHW2000载体的BsmBI酶切位点，引物F1：5’-ATACGTCTCGGGGAGCAAAAGCAGGGTAGATAATCACTCACCGAGTGACATCAACACCATGGTGAGCAAGGGCGAGG-3’引物F2：5’-ATACGTCTCATATTAGTAGAAACAAGGGTATTTTTCTTTACTTGTACAGCTCGTCC-3’，如何插入pHW2000载体的BsmBI酶切位点C、将上述质粒按任意比例，利用脂质体转染试剂，按转染试剂说明共转染真核细胞293T细胞，，转染后0-24h在转染后的真核细胞293T细胞中加入待检测药物，培养12-36h后，以不加待测药物的细胞转染组为对照，利用荧光显微镜或相应检测试剂观察或检测报告基因的表达丰度来判定待检测药物对甲型流感病毒RNA聚合酶的影响。