[发明专利]将外源基因导入盐藻的方法无效
| 申请号： | 200910248436.1 | 申请日： | 2009-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN101717781A | 公开（公告）日： | 2010-06-02 |
| 发明（设计）人： | 柴晓杰;靳非 | 申请（专利权）人： | 大连水产学院 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N1/13;C12R1/89 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种操作简单、省时快捷、不需要昂贵的仪器设备和试剂、转化率高及外源基因能稳定表达的将外源基因导入盐藻的方法：取盐藻细胞采用105个/mL接种量接种于培养液中，在温度为26℃的条件下，16h光照/8h黑暗交替静置培养5天，光照强度为100μEm-2sec-1；取10mL藻液4000rpm离心10min取沉淀，用10mL TE缓冲液洗沉淀一次；将沉淀悬浮于1.2mL TE缓冲液，取1mL悬浮液与0.5mL 0.2mol/L醋酸锂混合得混合液；取10μL浓度为600μg/mL表达外源基因的质粒DNA和0.1mL上述混合液，在29℃水浴中保温30min；加0.1mL 70％聚乙二醇29℃保温1h；加1.5mL无菌海水4000rpm离心10min；将沉淀悬浮于20mL培养液中于26℃中孵育48h。 | ||
| 搜索关键词： | 将外源 基因 导入 方法 | ||
【主权项】：
一种将外源基因导入盐藻的方法，其特征在于按如下步骤进行：a.取盐藻细胞采用105个/mL接种量接种于培养液中，在温度为26℃的条件下，16h光照/8h黑暗交替静置培养5天，光照强度为100μEm-2sec-1；b.取10mL藻液4000rpm离心10min取沉淀，用10mL TE缓冲液洗沉淀一次；c.将沉淀悬浮于1.2mL TE缓冲液，取1mL悬浮液与0.5mL 0.2mol/L醋酸锂混合得混合液；d.取10μL浓度为600μg/mL表达外源基因的质粒DNA和0.1mL上述混合液，在29℃水浴中保温30min；加0.1mL 70％聚乙二醇29℃保温1h；加1.5mL无菌海水4000rpm离心10min；将沉淀悬浮于20mL培养液中于26℃中孵育48h；所述培养液按如下方法配制：甲液：FeCl3·6H2O 5.2g MnCl2·4H2O 1.44g H3BO3 134.4g 乙二胺四乙酸二钠 180g NaH2PO4·2H2O 80g NaNO3 400g 将上述试剂溶于4L纯净水中；乙液：ZnCL2 2.1g CoCl2·6H2O 2g (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.9g CaSO4·5H2O 2g 将上述试剂溶于100mL纯净水中；将1L甲液中加25ml乙液混匀，避光保存，放置15天可使用，取1L灭菌海水加入1mL上述混合液即为培养液。
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