[发明专利]一种基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法

摘要

本发明涉及一种基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法，属于免疫沉淀领域，该免疫沉淀反应的方法是在生物样品中先加入抗体免疫沉淀反应后，再加进固定了蛋白A/G的载体分离，或在生物样品中加入固定了抗体的载体进行免疫沉淀反应后分离，其主要包括抗体的固定、免疫反应、洗脱步骤。它解决了现有免疫沉淀方法中有非特异性结合，可采用的抗体选择种类少，抗体活性损失大的问题，主要用来分离生物样本中的已知特定蛋白质的个别免疫沉淀法(IP)；用来研究整个蛋白质复合体；测定两种目标蛋白质是否在体内结合，确定一种特定蛋白质的新作用搭档的免疫共沉淀法(Co-IP)；用来研究与DNA结合的蛋白质的染色质免疫沉淀法(ChIP)；用来研究与RNA结合的蛋白质的RNA免疫沉淀法(RIP)等。

主权项

一种基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法，其特征在于，它的实现步骤包括：(1)抗体的固定：选取金磁微粒作为反应的固相载体，将目标生物物质的特异性抗体直接偶联在金磁微粒的表面；所述将目标生物物质的特异性抗体偶联在金磁微粒表面的方法包括：(1.1)金磁微粒预处理：取金磁微粒，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；加入偶联缓冲液，轻摇重悬，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清，即得到预处理好的金磁微粒；(1.2)偶联抗体：取目标生物物质的特异性抗体，加入偶联缓冲液稀释，再加入至预处理好的金磁微粒中，置于摇床中，0～37℃条件下，充分反应10min～30min，磁性分离，弃上清；加入清洗缓冲液，轻摇重悬，磁性分离，弃上清；加入保存缓冲液，2～8℃保存备用。(2)稀释目的生物样品：取目的生物样品，加入反应缓冲液稀释，保存备用。(3)免疫沉淀反应：(3.1)前处理：取上述步骤(1)中固定了目标生物物质的特异性抗体的金磁微粒，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；(3.2)反应：加入上述步骤(2)中稀释好的目的生物样品，混合均匀，0～37℃条件下，充分反应5min～60min，磁性分离，弃上清，即为含有免疫沉淀复合物的磁性微粒复合物；(4)免疫沉淀复合物的洗脱：取上述步骤(3.2)中的磁性微粒复合物，加入洗脱缓冲液，混合均匀，037℃条件下，充分反应5min～60min，磁性分离，移取分离后上清，即为所需的免疫沉淀复合物。