[发明专利]获取体外转染成功的实体瘤细胞的方法无效
| 申请号： | 200910255648.2 | 申请日： | 2009-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN101724604A | 公开（公告）日： | 2010-06-09 |
| 发明（设计）人： | 孙汶生;韩丽辉;曹莉莉;梁晓红;杜娟;张之勇;曲忠花;刘玉刚;刘素侠;石永玉;高立芬 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/31 |
| 代理公司： | 济南圣达专利商标事务所有限公司 37221 | 代理人： | 杨琪 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种获取体外转染成功的实体瘤细胞的方法，包括以下操作步骤：1)取对数生长期单细胞悬液，用有血清培养液37℃培养20h；2)在无菌EP管中混合反义寡核苷酸；3)在另一支无菌EP管中混合脂质体，混匀后室温放置5min；4)取上述反义寡核苷酸混合物和lipofectamine 2000混合物，混合均匀，室温放置20min，备用；5)转染。本发明有效地解决了体外转染技术无法稳定转染三维生长细胞团块内部细胞的问题，可以均匀的转染入待转染三维生长细胞中，从而达到最高的转染效率，最大限度的模拟相关分子在体内的功能。 | ||
| 搜索关键词： | 获取 体外 转染 成功 实体 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种获取体外转染成功的实体瘤细胞的方法，其特征在于：包括以下操作步骤：1)取对数生长期单细胞悬液，用有血清培养液调整浓度为6×105/ml，取2mL接种于25mL培养瓶中，37℃培养20h；2)在无菌EP管中混合反义寡核苷酸：取8μLPS-asODNs，加250μL Optim MEM，混匀；3)在另一支无菌EP管中混合脂质体：取10μL lipofectamine 2000，加250μL OptimMEM，混匀后室温放置5min；4)取上述反义寡核苷酸混合物和lipofectamine 2000混合物，混合均匀，室温放置20min，备用；5)转染：采取以下两种方式之一进行转染：取1)中的细胞，弃培养瓶中原来的培养液，加入2mL无血清培养液，继续培养6h后，胰蛋白酶消化细胞，用有血清培养液调整浓度为4×105/ml，500μL每孔加入到24孔板中，孔底预先铺有Poly-HEMA，继续孵育24h后，收集细胞，即得转染后的三维生长实体瘤细胞；或：取1)中的细胞，继续培养6h后，胰蛋白酶消化细胞，用有血清培养液调整浓度为4×105/ml，500μL每孔加入到24孔板中，孔底预先铺有Poly-HEMA，继续孵育24h后，收集细胞，即得转染后的三维生长实体瘤细胞。
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