[发明专利]一种基于寡聚核苷酸-非标记的纳米金检测三聚氰胺的方法

摘要

本发明公开了一种基于寡聚核苷酸-非标记的纳米金检测三聚氰胺的方法。依次包括以下步骤：1)制备一定粒径的纳米金溶胶，即反应液A；2)将特定序列寡聚核苷酸溶于缓冲溶液中，得反应液B；3)在反应液B中加入待测溶液进行反应；4)在步骤3)的反应液中加入反应液A，通过比色法，检测三聚氰胺。本发明的检测方法简便快速(检测过程不超过10min)、灵敏度高、选择性好、成本低、无需大型仪器设备即可达到国家关于乳及乳制品中三聚氰胺临时管理限量值规定的检测要求，可实现对原料及产品的现场快速检测。

主权项

一种基于寡聚核苷酸-非标记的纳米金检测三聚氰胺的方法，其步骤是：1)纳米金的合成：以氯金酸、柠檬酸三钠、超纯水为原料，通过磁力搅拌、加热100℃、回流、冷却操作，制备粒径为10nm～40nm、浓度为10-11M～10-8M反应液A，所述的反应液A为纳米金溶胶，所述的氯金酸与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶1～1∶5，反应温度为80℃～100℃，反应时间为25～60min；2)将特定序列寡聚核苷酸溶于缓冲溶液中，得反应液B，所述的特定序列寡聚核苷酸为单链寡聚核苷酸，其中的碱基均为T碱基或是含不同个数T碱基的寡聚核苷酸，碱基个数为1～200，其浓度为10-6M～10-4M；所述的缓冲溶液为Tris或PBS缓冲溶液，其浓度为5～20mM；所述的缓冲溶液中含有氯化钠，其浓度为0.05～0.5M；3)在反应液B中加入三聚氰胺标准溶液或经过预先处理的被测样品，混匀，静置，所述的反应液B为步骤2)中的特定序列寡聚核苷酸的缓冲溶液；所述的预先处理的被测样品为经过标准方法预处理的样品；所述的三聚氰胺浓度为10-9M～10-6M；静置时间为1～10min；4)以反应液A作为探针，通过目视比色法或紫外-可见分光光度法，检测三聚氰胺，所述的反应液A为步骤1)中的纳米金溶胶，所述的反应液A与特定序列寡聚核苷酸的摩尔比为1∶100～1∶1000；紫外-可见分光光度法检测波长为400～750nm。