[发明专利]从家蝇幼虫中诱导并提取金属硫蛋白的方法

摘要

本发明的从家蝇幼虫中诱导并提取金属硫蛋白的方法，利用Cd2+，Zn2+，Cu2+的金属离子生物诱导剂的培养基，在非金属培养器皿中培养3-5日龄家蝇幼虫，将家蝇幼虫漂洗、灭菌、低温高速均浆，膜过滤、色谱分离、洗脱浓缩，真空冷冻干燥，能够获得分子量5300-6500dDa含有20-27％半胱氨酸的Zn\Cu金属硫蛋白及其亚型，分子结构中带有少量芳香族氨基酸。经过生物诱导后的幼虫蛋白中金属硫蛋白得率能到达1mg/g，本发明的生产方法成本低、纯度高、产量高。

主权项

从家蝇幼虫中诱导并提取金属硫蛋白的方法，其操作步骤如下：a、以麦麸、水、10％EM复合菌群和含有锌、铜、铬复合离子诱导剂为原料，常温发酵10～50小时制成培养基；b、取家蝇的卵植入a步骤制得的培养基内，温度控制在30～35摄氏度，二十四小时后在培养基表面均匀喷洒5％浓度的相当于培养基总量10％的Cd2+、Zn2+、Cu2+金属离子诱导剂，培养4～6天，即制得家蝇幼虫蛋白原料；c、取经b步骤培养的幼虫在4～20摄氏度纯净水中漂洗2次，再放入20～50摄氏度、10％过氧化氢溶液浸泡10～120分钟；d、将经c步骤处理的幼虫在无菌水中漂洗30分钟，置于离心干燥机中干燥3～20分钟，取出置于-30～-70摄氏度下冷冻保存；e、取经d步骤处理的家蝇幼虫蛋白原料投入到高速均浆机中，按照投入原料的1∶1添加常温甘氨酸缓冲液制成均浆液，甘氨酸缓冲液的PH值7～9；浓度0.1～2mol/L；f、再将e步骤得到的混合液进行0.1～0.45靘滤膜过滤，滤液浓度为1～10g/mL，膜过滤蛋白分子量12000～15000Da溶液；g、将经f步骤制得的溶液进行模拟移动床色谱分离，洗脱泵流量0～1000mL/min，压力0～10Mpa；进样泵流量0～30mL/min，压力0～8Mpa；萃取泵流量0～100mL/min，压力0～10MPa；工作温度20～25摄氏度；模拟移动床色谱参数：解吸段4根柱、精制段4根柱、吸附段4根柱，进样流速Uf＝8～12mL/min，洗脱泵流速Ud＝340～380mL/min，萃取液流速Ue＝230～250mL/min，残余液流速Ur＝118～142mL/min，切换时间ts＝14～18min；h、将经g步骤处理的残余液蛋白分子量5500～6500Da，注入真空浓缩罐内，经减压浓缩含水1～50％后，再进行真空冻干机冻干20小时，即制成金属硫蛋白产品。