[发明专利]GRG31和GRG36 EPSP合酶的定向进化

摘要

本发明提供赋予细菌、植物、植物细胞、组织和种子除草剂抗性或耐受性的组合物和方法。组合物包括编码除草剂抗性或耐受性多肽的多核苷酸，含有那些多核苷酸的载体，以及含有载体的宿主细胞。本发明的核苷酸序列可用在DNA构建体或表达盒中用于转化生物体，包括微生物和植物，和在其中表达。组合物还包括转化的细菌、植物、植物细胞、组织和种子。本发明尤其是提供了编码草甘膦抗性或耐受性多肽的分离的多核苷酸，特别是SEQ ID NO：2和4的多肽变体。另外，本发明涵盖与所述多核苷酸对应的氨基酸序列。尤其是本发明提供了分离的多核苷酸，其含有编码SEQ ID NO：7-28中所示氨基酸序列的核苷酸序列、或者SEQ ID NO：29或30中所示的核苷酸序列。

主权项

由编码草甘膦耐受性EPSP合酶的分离的核酸分子组成的组合物，其中所述核酸分子选自下组：a)编码SEQ ID NO：2的变体的核苷酸序列，其中所述变体包含如下一或多个残基：i)与SEQ ID NO：2氨基酸位置75相对应位置上的半胱氨酸残基；ii)与SEQ ID NO：2氨基酸位置76相对应位置上的天冬氨酸残基；iii)与SEQ ID NO：2氨基酸位置77相对应位置上的天冬酰胺、丙氨酸、谷氨酰胺或苏氨酸残基；iv)与SEQ ID NO：2氨基酸位置78相对应位置上的丝氨酸残基；v)与SEQ ID NO：2氨基酸位置81相对应位置上的丝氨酸或甘氨酸残基；vi)与SEQ ID NO：2氨基酸位置82相对应位置上的缬氨酸、苏氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸残基；vii)与SEQ ID NO：2氨基酸位置86相对应位置上的丙氨酸残基；viii)与SEQ ID NO：2氨基酸位置87相对应位置上的甘氨酸残基；ix)与SEQ ID NO：2氨基酸位置88相对应位置上的苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或组氨酸残基；x)与SEQ ID NO：2氨基酸位置95相对应位置上的丝氨酸、谷氨酰胺或苏氨酸残基；xi)与SEQ ID NO：2氨基酸位置206相对应位置上的缬氨酸、丝氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或苏氨酸残基；和xii)与SEQ ID NO：2氨基酸位置215相对应位置上的赖氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基；和b)编码SEQ ID NO：4的变体的核苷酸序列，其中所述变体包含如下一或多个残基：i)与SEQ ID NO：4氨基酸位置90相对应位置上的异亮氨酸残基；ii)与SEQ ID NO：4氨基酸位置145相对应位置上的谷氨酰胺残基；iii)与SEQ ID NO：4氨基酸位置350相对应位置上的苏氨酸残基；和iv)与SEQ ID NO：4氨基酸位置410相对应位置上的甲硫氨酸残基。