[发明专利]可溶性透明质酸酶的大规模生产

摘要

本发明提供用于制备大规模的可溶性透明质酸酶制备品的方法。该方法利用含有多个活性拷贝的编码可溶性透明质酸酶的核酸的细胞，以及利用多种加料和温度的变化，由此经编码的可溶性透明质酸酶被分泌到细胞培养基中。

主权项

用于产生可溶性rHuPH20的方法，包括：a)用编码可溶性rHuPH20的细胞的接种物接种生物反应器中的细胞培养基以产生细胞培养物，其中：所述细胞是已转染编码rHuPH20的表达载体的DG44中国仓鼠卵巢(CHO)细胞；rHuPH20包含可溶性人PH20多肽；所述细胞包含150至300个拷贝的编码所述可溶性人PH20多肽的核酸；所述生物反应器含有至少100升的细胞培养物；接种细胞密度是4×105细胞/mL；以及将所述细胞在37℃培养；b)用含有33g/L葡萄糖、32mM L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、16.6g/L酵母提取物和33mg/L胰岛素的第一加料培养基给该细胞加料，其中将所述加料培养基以细胞培养物体积的4％的体积加入到该培养物中；c)用含有33g/L葡萄糖、16mM L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、33.4g/L酵母提取物和0.92g/L丁酸钠的第二加料培养基给该细胞加料，其中将所述加料培养基以细胞培养物体积的4％的体积加入到该培养物中；并且将温度降低至36.5℃；d)用含有50g/L葡萄糖、10mM L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、50g/L酵母提取物和1.8g/L丁酸钠的第三加料培养基给该细胞加料，其中将所述加料培养基以细胞培养物体积的4％的体积加入到该培养物中；并且将温度降低至36℃；e)用含有33g/L葡萄糖、6.6mM L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺、50g/L酵母提取物和0.92g/L丁酸钠的第四加料培养基给该细胞加料，其中将所述加料培养基以细胞培养物体积的4％的体积加入到该培养物中；并且将温度降低至35.5℃；f)继续培养该细胞直至生存力跌落到低于50％；和g)获得收获细胞培养液。