[发明专利]具有改良特性的嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(AMYS)变体

摘要

本发明描述了亲本α-淀粉酶的变体，该变体与该亲本α-淀粉酶相比呈现出下列性质中至少一种性质的改变：比活、底物特异性、底物结合、底物裂解、热稳定性、pH依赖活性、pH依赖稳定性、氧化稳定性、钙依赖性、pI和洗涤性能。该变体适用于淀粉转化、乙醇生产、衣物洗涤、盘碟洗涤、硬表面清洁、纺织品脱浆和/或增甜剂生产。

主权项

具有α‑淀粉酶活性和至少一种改变的特征的变体多肽，所述改变的特征改良酶的性能，所述变体多肽包含：与选自AmyS(SEQ ID NO：1)或AmyS的截短变体(SEQ ID NO：2)的亲本α‑淀粉酶多肽具有至少60％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，和在通过比对变体多肽与亲本多肽而确定的亲本α‑淀粉酶多肽的氨基酸残基相应的氨基酸残基处具有至少一种以下突变，其中所述突变改变来自亲本多肽的氨基酸残基：a)在一个或多个位点引入带正电的氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自D19、N28、E29、Q86、Q89、Q97、N224、N271、N281、D306、D318、Q319、Q358、D393、Q443和D458；b)引入一个或多个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自74A、115L、124K、124R、132A、132C、135A、145A、146A、148A、148N、159A、159C、159D、159E、159F、159G、159H、159K、159L、159N、159R、159S、159T、159V、169A、169L、169M、169Y、179A、181A、181C、181D、181E、181L、181P、181Q、181V、181Y、242A、242D、242E、242Q、261L、271A、271V、278A、278H、278K、278N、278R、281A、281L、281M、302D、302M、304D、304E、304M、321A、321H、321Q、321R、333Q、378D、378N、378R、382D、398A、418A、418M、418N、420A、421R、432A、432D、432L、432M、432N、432Q、432R、432Y、437D、437G、437H、437L、437M、437Y、446A、446Y、454A、464Q、464Y、474A、474E、474K、474L、474M、474N、474P、474Q、474R、474S和474V；c)引入一个或多个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自6I、6N、6Q、6T、6V、14T、16F、25A、25C、25G、25Q、27M、36Q、36S、39G、39V、50I、50L、50M、50N、50Q、52S、53T、67N、67S、80D、80I、90E、133P、133V、137M、137S、141E、141I、141L、141M、141Q、141R、141S、141V、150E、151I、152G、155S、155Y、168W、173T、188P、193F、193K、193L、193Y、213L、213M、213V、217Q、220P、220Q、220R、220S、220V、221I、221S、249E、250F、250I、250M、252L、253Y、254E、254F、254T、254V、255F、255K、255W、257L、257M、257S、257V、258D、258G、258H、258K、258Q、258T、258V、268F、274W、283M、283N、283V、285E、285Q、293G、293K、294W、301F、301I、301P、301R、301T、301W、309D、309V、312H、312S、312V、312Y、313G、313H、313I、313L、313S、313V、318T、338A、338C、338G、338M、338T、339K、339T、339V、340A、340M、340Q、340T、343C、343I、343P、343R、343Y、345I、345Q、369I、369T、370G、375T、385T、386K、394L、394V、400A、400N、400V、402H、402I、402T、402V、402W、403A、403E、403G、403Q、403R、403T、403V、404C、404E、404G、404I、404V、419A、419C、419M、419T、422E、422G、433A、433H、433I、433K、433L、433M、433V、433Y、442A、442G、442N、442R、442S、442T、442V、442W、442Y、445G、445I、445N、445T、445V、445W、447I、447N、447Q、447W、447Y、448C、448F、448G、448H、448I、448N、448Y、450C、450H、450M、450N、450R、450S、450T、450W、455G、455I、455P、455V、463A、463M、463S、463T、463V、463W、465G、465I、465K、465N、465T、465V、469D、469W、469Y、471I、471V、473G、473Y、476A、476G、476L、476M、476N和476T；d)引入一个或多个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自124N、125A、125K、125N、130A、130S、159A、159D、159E、159G、159H、159K、159L、159N、159R、159S、159T、166F、166G、166H、166S、166Y、169L、179A、179P、180A、180D、180H、180K、180L、180N、180T、180V、180Y、181A、181D、181E、181G、181P、181R、181S、181V、187A、187C、187K、187N、187P、187Q、187R、187S、242H、242N、278H、278K、278N、278R、281M、302D、304M、304Y、321H、321Q、321R、333Q、432Q、437Y、446A、474Q和474S；e)引入一个或多个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自6A、6D、6E、6H、6I、6K、6L、6M、6N、6P、6Q、6R、6S、6T、6V、6W、6Y、13K、14F、14T、14Y、15A、15D、15E、015G、15H、15K、15N、15P、15Q、15R、15S、15T、15W、16A、16E、16G、16H、16K、16N、16P、16Q、16R、16T、25C、39D、39E、39N、39Q、81Y、121P、139D、139H、139R、139Y、177A、188D、191H、191K、192A、192D、192G、192N、192P、192Q、192S、192T、192V、192Y、196A、196C、196D、196E、196F、196H、196I、196K、196P、196R、196S、196T、196V、201A、201E、201G、201H、201M、202H、216E、216G、216H、216M、216Q、216R、216S、216T、216Y、221A、221D、221F、221I、221L、221M、221N、221R、221S、221V、221Y、237G、240G、240N、240P、240Q、240R、240T、246R、250A、250D、250E、250F、250G、250I、250K、250L、250M、250N、250Q、250R、250S、250W、252K、268A、268D、268E、268G、268H、268K、268N、268P、268Q、268R、268S、274A、274D、274G、274I、274K、274L、274N、274Q、274R、274S、274T、275K、285Q、285Y、293K、293R、318A、318F、318G、318I、318K、318L、318M、318R、318S、318T、318V、318Y、319C、319D、319H、319I、319K、319R、319Y、320K、320R、320T、338A、338G、338I、338M、338P、338S、338V、339G、339P、340A、340D、340E、340H、340K、340N、340Q、345E、363D、363E、363M、363N、363Q、363S、366Q、370A、370D、370E、370H、370K、370N、370Q、370S、375A、375D、375E、375K、375N、375Q、375R、375S、419A、419I、419M、419P、419S、419V、448Y、452N、452Q、452R、452S、471R和471Y；和f)引入一个或多个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自I181A、I181P、I181C、I181E、I181Y、S242A、S242E、G132A、N193Y和E188P。