[发明专利]RNA的选择性的5′连接标记

摘要

本发明提供了用于选择性地5′连接标记需要的RNA分子类别的新颖的组合物、试剂盒和方法，它们采用RNA 5′多磷酸酶、RNA 5′单磷酸酶、加帽酶、脱帽酶、核酸焦磷酸酶和RNA连接酶以及其它酶，所述需要的RNA分子类别的差别在于它们的5′末端上的特定化学部分。5′标记的RNA分子可以用于合成标记的第一链cDNA、双链cDNA和有义或反义RNA，它们用于多种用途。

主权项

5′连接标记样品中具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA的方法，所述方法包含下述步骤：(A)提供：(i)样品，其含有具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA，包括其中所述样品另外含有具有5′单磷酸基团的RNA和/或加帽的RNA和/或具有5′羟基的RNA；(ii)RNA 5′多磷酸酶；(iii)显示标记的受体寡核苷酸；和(iv)RNA连接酶；(B)使所述样品接触RNA 5′多磷酸酶，接触的条件和时间足以使得其中具有5′多磷酸基团的未加帽的RNA被转化成具有5′单磷酸基团的RNA；和(C)使来自步骤(B)的样品接触受体寡核苷酸和RNA连接酶，接触的条件和时间足以使得其中受体寡核苷酸的3′末端被连接到具有5′单磷酸基团的RNA上，但是不连接到加帽的RNA上，并且生成5′‑连接标记的RNA。