[发明专利]可维持从核苷酸模板酶促合成双链核苷酸的非天然聚合酶底物及其使用的方法

摘要

本申请描述了可维持从核酸模板酶促合成双链核酸的核苷酸类似物。所述核苷酸类似物包含：(i)选自以下的碱基：腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶及他们的类似物；(ii)通过可裂解连接子连接于碱基或碱基类似物的标记；(iii)脱氧核糖；以及(iv)一个或多个磷酸基。所述连接子和/或标记抑制另一核苷酸底物向延伸的引物链的模板定向聚合酶掺入。此外，连接子的裂解留下连接于碱基的残基，所述残基不存在于在天然核苷酸中而且不抑制引物链的延伸。3’羟基未被封闭，因此，所述核苷酸类似物可在合成测序方法中用做可逆终止子。本申请也描述了利用所述底物的DNA测序方法。

主权项

1.一种由以下式(I)代表的化合物：其中：B是选自腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶或他们各自的类似物的碱基；L₁是在碱基B和F间形成键的基团；F是在L₁和L₂间形成键的杂原子；L₂就它与F的键合而言是化学上不稳定基团，且与R₂成键；L₃就它与F的键合而言是化学上不稳定基团，且与R₂成键；R₂是包含报道分子的基团；R₁是抑制向延伸中的寡核苷酸3’末端掺入核苷三磷酸的模板定向聚合酶掺入反应速率的基团，这种抑制发生在L₂-R₂从先前掺入事件裂解之前；L₂-R₂防止向已掺入式(I)化合物的延伸中的寡核苷酸3’末端经模板定向聚合酶掺入反应掺入式(I)的化合物；l是整数，及m＝3l-1。