[发明专利]核酸纯化方法

摘要

本发明涉及利用核酸结合相纯化核酸的方法，所述核酸结合相的pKa为8‑13的核酸结合基团A不足，或具有基团A和在结合期间、优选在洗脱期间中性荷电的结合抑制性基团N；所述方法包括以下步骤：(a)在低于核酸结合基团A的pK的pH下(结合pH)结合核酸与核酸结合相；(b)在高于所述结合pH的pH下(洗脱pH)洗脱核酸。此外，还公开了可用于纯化核酸的相应试剂盒及核酸结合相。本发明的技术能采用低盐浓度纯化核酸，特别是洗脱，因而可直接处理纯化的核酸，例如用于PCR。

主权项

1.利用核酸结合相通过结合和洗脱来纯化核酸的方法，其特征在于，所述核酸结合相具有：(i)pKa为8-13的核酸结合基团A，其中所述基团A为取代或未取代的氨基，且所述基团A是含有氨基的丙烯酸酯的一部分或存在于具有水解不稳定的Si-N或Si-O键的反应活性硅烷中，其中，所述含有氨基的丙烯酸酯选自：N,N-(二甲基氨基)乙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二甲基氨基)乙酯、N,N-(二甲基氨基)乙基甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N-(二甲基氨基)乙酯、N,N-(二甲基氨基)丙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二甲基氨基)丙酯、N,N-(二甲基氨基)丙基甲基丙烯酰胺,甲基丙烯酸N,N-(二甲基氨基)丙酯、N,N-(二乙基氨基)乙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二乙基氨基)乙酯、N,N-(二乙基氨基)乙基甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N-(二乙基氨基)乙酯、N,N-(二乙基氨基)丙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二乙基氨基)丙酯、N,N-(二乙基氨基)丙基甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N-(二乙基氨基)丙酯、N,N-(二异丙基氨基)乙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二异丙基氨基)乙酯、N,N-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N-(二异丙基氨基)乙酯、N,N-(二异丙基氨基)丙基丙烯酰胺、丙烯酸N,N-(二异丙基氨基)丙酯；所述反应活性硅烷选自：式中，n是1到5；R是C1到C6烷基；和*是氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、二甲基氨基、二乙基氨基、二异丙基氨基或二丙基氨基；(ii)在所用结合pH下具有中性电荷的电中性基团N，其中所述基团N是羟基，且所述基团N是通过丙烯酸酯化合物引入的，其中，所述丙烯酸酯化合物选自：甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)、单甲基丙烯酸甘油酯(异构体混合物)、单甲基丙烯酸乙二醇酯、丙烯酸羟乙酯、单丙烯酸甘油酯(异构体混合物)和单甲基丙烯酸乙二醇酯；和所述方法至少具有以下步骤：(a)在低于核酸结合基团A的pK的pH下(结合pH)结合核酸与核酸结合相；(b)在高于所述结合pH的pH下(洗脱pH)洗脱核酸。