[发明专利]延长的DICER酶底物和特异性抑制基因表达的方法

摘要

本发明提供一种用于抑制细胞中目的基因的表达的组合物和方法，包括用分离的双链核酸(dsNAs)接触细胞，从而有效降低细胞中目的基因的表达。本发明所述的dsNAs被设计为具有脱氧核糖核苷酸的结构(在大多数的实施例中，这种设计包括至少一个脱氧核糖核苷酸-脱氧核糖核苷酸的碱基对)，设计的脱氧核糖核苷酸可以指导Dicer酶在双链核酸(dsNAs)的分子内部剪切。本发明所述的dsNAs分子的脱氧核糖核苷酸位于dsNAs的区域内部，并能通过Dicer酶剪切从而分离产生一种有活性的、不再含有脱氧核糖核苷酸结构(例如脱氧核糖核苷酸-脱氧核糖核苷酸的碱基对)siRNA。这种DNA延长的Dicer酶底物siRNAs(DsiRNAs)已被证实具有更多的RNA抑制剂活性，相比于双链RNA延长的DsiRNAs而言。DsiRNAs也被发现能引导碱基链错配。

主权项

一种分离的双链核酸(dsNA)，包括具有5’末端和3’末端的第一寡核苷酸链和具有5’末端和3’末端的第二寡核苷酸链，其中，所述第一寡核苷酸链具有27‑49个核苷酸残基，其中从所述第一寡核苷酸链的5’末端的第一个核苷酸开始(第1位)，第1至第23个核苷酸是核糖核苷酸；所述第二寡核苷酸链具有27‑53个核苷酸残基，并具有23个连续的核糖核苷酸，这23个连续的核糖核苷酸与所述第一寡核苷酸链的第1至第23个核糖核苷酸进行碱基配对以形成双链；所述第一寡核苷酸链的5’末端和所述第二寡核苷酸链的3’末端形成钝性末端或1‑4个核苷酸组成的3’悬垂结构；所述第一寡核苷酸链的3’末端和所述第二寡核苷酸链的5’末端形成钝性末端；所述第一寡核苷酸链的第24至3’末端的核苷酸残基中的至少一个是脱氧核糖核苷酸，并与所述第二寡核苷酸链的脱氧核糖核苷酸形成碱基对；所述第二寡核苷酸链沿其至少19个核糖核苷酸与靶标RNA充分互补，以在双链核酸被导入到哺乳动物细胞时降低目的基因的表达。