[发明专利]一种三孢布拉氏霉菌发酵生产番茄红素的方法

摘要

本发明提供了基于三孢布拉氏霉菌生物学特性的罐批发酵方法，该方法包括母种的茄子瓶斜面培养、种液的15L-150L-1500L种子罐扩大培养、正负菌1∶10混合的10m3发酵罐发酵培养。优选地，在番茄红素的罐批发酵的步骤中还包括将孢子囊用已灭菌的生理盐水洗脱接入一级种子培养基的接种方式，发酵结束番茄红素的产量在800mg/L。本发明还提供基于番茄红素理化特性的后提取方法，该方法包括发酵产物的预处理、番茄红素的提取、浓缩、结晶、脱溶的步骤。优选地，在番茄红素后提取的步骤中还包括三次循环提取和三步脱溶的步骤，三次循环提取后番茄红素的提取率在85％以上，三步脱溶后番茄红素的溶剂残留量可控制在50ppm以内。

主权项

一种基于三孢布拉氏霉菌生物学特性的罐批发酵方法，其特征在于：茄子瓶斜面培养：用无菌接种环辅助10mL无菌水洗脱孢子，取0.2mL孢子悬液涂至平板固体培养基，28.5℃培养20h后挑单菌落接种至茄子瓶斜面固体培养基上，28.5℃培养，正菌培养2周、负菌培养3周可用；其中，固体培养基的成分为(w/v)：玉米粉4.7％、麦芽浸粉1.0％、琼脂粉0.8％，50℃温水调制定容，pH值灭菌前以6.4为宜，纱布、牛皮纸封口，121℃灭菌30min；种液的15L-150L-1500L种子罐扩大培养：接种前2d将培养好的斜面母种置于18℃培养48h后，用无菌接种环辅助10mL已灭菌的生理盐水洗脱孢子，15个斜面母种的洗脱孢子悬液并瓶于1个250mL无菌三角瓶中，在火焰圈的保护下移种于装有10L种液培养基的15L气升式发酵罐中，28℃恒温培养48h，然后按10％的接种量接入装有100L种液培养基的150L搅拌釜式发酵罐中扩培，28℃恒温培养48h，接着对负菌同上操作按10％的接种量接入装有1000L种液培养基的1500L搅拌釜式发酵罐中扩培，28℃恒温培养48h；其中，150L、1500L搅拌釜式发酵罐的搅拌转速分别为400r/min和280r/min、空气流量分别为12m3/h和120m3/h，种液培养基的成分为(w/v)：玉米粉4.7％、黄豆粉2.3％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁500ppm、氯化钙50ppm、硫酸亚铁50ppm、硫酸锰50ppm、硫酸铜50ppm、VB14ppm，冷水调制定容，pH值灭菌前以6.4为宜，121℃灭菌30min；正负菌1∶10混合的10m3发酵罐发酵培养：将经过扩培的正负菌按1∶10的比例接种于装有7m3发酵培养基的10m3搅拌釜式发酵罐中，28℃恒温发酵30h后按0.1％的量添加2，6-二甲基吡啶，再28℃恒温发酵72h结束发酵；其中，搅拌转速为200r/min、空气流量为840m3/h，发酵培养基的成分为(w/v)：玉米油10％、玉米粉1.925％、黄豆粉4.4％、磷酸二氢钾0.055％、磷酸氢二钠0.336％、磷酸二氢钠0.018％、VB10.4ppm，冷水调制定容，pH值灭菌前以7.5为宜，121℃灭菌30min。