[发明专利]金缕梅的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种金缕梅组织培养方法，其培养步骤为：外植体消毒：(1)取金缕梅种子分别用酒精及次氯酸钠消毒，用无菌水冲洗并剥去外种皮后，进行(2)种子无菌萌发→(3)不定芽增殖培养→(4)诱导培养→(5)增殖培养→(6)壮苗培养→(7)生根培养→(8)炼苗和移栽。采用组织培养方法，大大缩短金缕梅种子的育苗周期。与扦插繁殖相比，能有效地提高金缕梅的繁殖系数。在一个生长周期内，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖50～60倍。

主权项

一种金缕梅的组织培养方法，其培养步骤如下：(1)外植体消毒处理选取金缕梅单株当年成熟的健壮种子，依次进行自来水冲洗2h，于超净工作台上用70％乙醇灭菌30s，无菌水冲洗3～4次，再用稀释10倍的浓度为0.525％NaClO灭菌20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干种子表面水分，并剥去木质化外种皮待接入MS或1/2MS基本培养基中，蔗糖20～30g·L-1，琼脂0.7％，pH 5.7，培养温度25℃；(2)种子无菌萌发将剥好的成熟胚接入MS基本培养基中，暗培养2周后萌发；①无菌苗的炼苗与移栽将瓶盖打开，室温下炼苗3d后，取出幼苗，洗净，移栽到准备好的珍珠岩或蛭石苗床上，保持温度20～25℃，湿度85％～95％，适当遮荫，成活率达90％；②胚轴组织培养a.诱导培养将初代培养中萌发的金缕梅幼苗切除胚根后接入MS+生长调节物质BA1.0mg·L-1+生长调节物质2，4-D2.0mg·L-1的诱导培养基中培养30天，光照条件：光照/黑暗，其中光照16h.d-1，光照度为24001x；b.不定芽增殖培养将诱导培养基中的淡黄色的愈伤组织接入MS+生长调节物质BA1.0mg·L-1+生长调节物质NAA0.1mg·L-1的增殖培养基中培养6周，光照条件同a诱导培养；c.增殖培养将淡黄色愈伤组织中萌发的不定芽接入MS+生长调节物质BA1.0mg·L-1+生长调节物质NAA0.1mg·L-1的增殖培养基中培养30天，光照条件同a诱导培养；d.壮苗培养将增殖培养基中叶色浓绿、长度为1～2cm的不定芽逐个切下，接入MS基本培养基中培养30天，光照条件同a诱导培养；e.生根培养将壮苗培养后长势旺盛的芽切去茎基部褐色物质后接入生根培养基1/2MS+生长调节物质BA0.1mg·L-1+生长调节物质NAA1.0mg·L-1中，先暗培养2周，再光照培养2周后生根，光照条件同a诱导培养；f.炼苗和移栽将有生根的金缕梅植株的培养瓶的瓶盖打开，室温下炼苗3d后，取出试管苗，洗净，移栽到准备好的珍珠岩或蛭石苗床上，保持温度20～25℃，湿度85％～95％，适当遮荫，成活率达90％。