[发明专利]利用马铃薯淀粉废水培养枯草芽孢杆菌

摘要

本发明涉及一种利用马铃薯淀粉废水培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的方法，属于生物技术领域。其特征在于：发酵培养基以马铃薯淀粉废水为主要营养物质来源，培养步骤包括：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、菌剂制备。由本发明技术方案生产的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)能高效原位降解蔬菜叶片上有机磷农药残留，促进蔬菜生长，降低蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量，保障食品安全；本发明技术方案还能有效资源化马铃薯淀粉废水，减少高浓度废水排放，保护生态环境。

主权项

利用马铃薯淀粉废水培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的方法，其特征在于：发酵培养基以马铃薯淀粉废水为主要营养物质来源，培养步骤包括：(1)培养基配制：1)菌种保藏培养基(固体)：硫酸铵0～3g，磷酸氢二钾0～2g，硫酸镁0～0.1g，琼脂20g，加马铃薯淀粉废水至1L，pH 7.0‑7.5；2)菌种活化培养基(液体)：硫酸铵0～3g，磷酸氢二钾0～2g，硫酸镁0～0.1g，加马铃薯淀粉废水至1L，pH 7.0‑7.5；3)种子培养基(液体)：硫酸铵0～30g，磷酸氢二钾0～20g，硫酸镁0～1.0g，加马铃薯淀粉废水至10L，pH 7.0‑7.5；4)发酵培养基(液体)：硫酸铵0～0.5kg，磷酸氢二钾0～0.4kg，硫酸镁0～20g，加马铃薯淀粉废水至200L，pH 7.0‑7.5；以上培养基均在121℃灭菌15‑30min；(2)菌种转接与活化：挑取斜面保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)至菌种保藏培养基平板，35℃连续划线、挑单菌落培养两次后，挑取单菌落在菌种活化培养基中，于35℃，150‑200r/min摇床振荡培养12‑24h；(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％‑20％的接种量接种步骤2活化的有机磷农药降解菌，于25‑37℃，通空气培养12‑24h，得到液体种子；(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％‑20％的接种量接种步骤3制备的有机磷农药降解菌液体种子，于25‑37℃，通空气培养18‑60h，得到活菌体培养物，菌体浓度达到60亿CFU/mL以上；(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，加入甘氨酸(质量分数0.2％‑2％)和甘油(质量分数0.2％‑5％)，灌装保藏。使用时用水稀释500‑1000倍。